荧光染料的重要应用,以及如何判断亮度?

 

荧光染料,顾名思义,会发出荧光的染料。荧光染料是指吸收某一波长的光波后能发射出另一波长大于吸收光的光波的物质。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。荧光染料可以单独使用,也可以组合成复合荧光染料使用。

 

荧光染料

图源:百度百科

 

一、荧光染料的工业应用

 

荧光染料常用于荧光染料产品的制备,以及增白洗衣粉中的增白剂,指示信号用的各种荧光路标漆,荧光标志服等。

 

荧光染料的其他用途包括: 渗漏污水系统包括水和工业的污染物、连接系统、测量发电厂排出的液体、洗手间的渗漏、非法的连接污水管监察,研究流量和绘图,分析腐败的系统,此外还用于纤维织物印染和某些特种标志(如暗处符号)及军事追踪等。

 

荧光染料的工业应用

图源:百度百科

 

二、荧光染料的科研应用

 

荧光染料,由于灵敏度高,操作方便,逐渐取代了放射性同位素作为检测标记,其广泛应用于荧光免疫,荧光探针,细胞染色等。包括特异性的DNA染色,用于染色体分析、细胞周期、细胞凋亡等相关研究。另有很多核酸染料在多色染色系统中是非常有用的复染剂,可作为背景对照,标记细胞核使细胞内结构的空间关系一目了然。

 

1.免疫分析

 

荧光标记的单克隆抗体技术为流式细胞仪在研究细胞膜和细胞内各种功能性抗原、肿瘤基因蛋白等领域扩展了无限的应用空间。荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上。免疫荧光标记最常用的染料有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)、藻红蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。

 

2.核酸检测

 

核酸荧光染料细胞核染色后定量测量细胞所发出的荧光强度,就可以确定细胞核中DNA、RNA的含量,并可以对细胞周期和细胞的增殖状况进行分析。有多种荧光染料可以对细胞中的DNA或RNA染色,常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。

 

核酸检测

图源:百度百科

 

三、荧光染料的亮度如何判断?

 

荧光染料是细胞生物学等科学研究中不可或缺的重要工具,荧光滤色块是荧光显微镜中至关重要的一个部件。那么一般荧光染料亮度怎么进行比较?

 

荧光染料的亮度可以用来比较不同荧光染料的荧光标记效果,通过阴性细胞群与阳性细胞群的荧光信号之间的关系来表示。但阴性细胞群的荧光信号受到信号强度、自发荧光、非特异性染色、仪器的电子噪声等多个因素相关。

 

荧光染料染色指数是阳性细胞群的平均荧光强度与阴性细胞群的平均荧光强度之差与阴性细胞群荧光强度标准差之间比值的一半。荧光染料染色系数只和抗体克隆与质量、荧光团纯度与质量、荧光修饰比、激光线及其功率、长通和带通滤光片、目的细胞等因素相关。

 

荧光染料的染色指数与荧光染料的亮度呈正相关,也就是荧光染料亮度越高,染色系数也就高。

 

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