涨知识~常见的荧光染料,收藏起来了!

 

作为生物科研狗,相信大家都或多或少接触过荧光染料,但或许不是每个人都很了解它。我们今天就来简单说说啥是荧光染料,以及主要有哪些常见的荧光染料。

 

啥是荧光染料呢?

 

荧光染料就是能发出荧光的染料,是指吸收某一波长的光波后能发射出另一波长大于吸收光的光波的物质。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。在吸收紫外线或可见光后,能把短波长的光转变为波长较长的可见光波而反射出来,呈闪亮的鲜艳色彩。有多鲜艳呢?不多说,直接上图:

 

荧光染料

 

咋样?漂亮不?

 

荧光染料可以单独使用,也可以组合成复合荧光染料使用。其中复合荧光染料是利用荧光共振能量转移技术合成的荧光染料,由距离非常近、能量可以在彼此间传递的一个供体及一个受体荧光物分子所组成。复合染料在受体分子的激发波长被激发,在供体分子的发射波长发射一个光子。荧光染料发展非常迅速,已开发的用于科研和临床应用的荧光染料已基本覆盖了由紫外到可见光及红外的整个光谱范围 。

 

荧光染料的科研应用

 

荧光染料,由于灵敏度高,操作方便,逐渐取代了放射性同位素作为检测标记,其广泛应用于免疫荧光,荧光探针,细胞染色等。包括特异性的DNA染色,用于染色体分析、细胞周期、细胞凋亡等相关研究。另有很多核酸染料在多色染色系统中是非常有用的复染剂,可作为背景对照,标记细胞核使细胞内结构的空间关系一目了然。

 

  1. 免疫荧光

免疫荧光技术( Immunofluorescence technique ),用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法;这两种方法总称免疫荧光技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合,用于检测或定位各种抗原,也可以与其他蛋白质结合,用于检测或定位抗体,但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用,所以人们习惯将免疫荧光技术又称为荧光抗体技术,以荧光抗体方法较常用。用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞(或组织)化学技术。

 

  1. 啥是荧光探针(fluorescence probe)?

荧光探针是指在紫外-可见-近红外区有特征荧光,并且其荧光性质(激发和发射波长、 强度、寿命、 偏振等)可随所处环境的性质,如极性、折射率、粘度等改变而灵敏地改变的一类荧光性分子。与核酸(DNA或RNA)、蛋白质或其他大分子结构非共价相互作用而使一种或几种荧光性质发生改变的小分子物质。可用于研究大分子物质的性质和行为。

 

目前常用的荧光探针有荧光素类探针、无机离子荧光探针、荧光量子点、分子信标等。荧光探针除应用于核酸和蛋白质的定量分析外,在核酸染色、DNA电泳、核酸分子杂交、定量PCR技术以及DNA测序上都有着广泛的应用。我们以后主要讨论荧光素类探针。

 

荧光标记的单克隆抗体技术为流式细胞仪在研究细胞膜和细胞内各种功能性抗原、肿瘤基因蛋白等领域扩展了无限的应用空间。荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上。免疫荧光标记最常用的染料有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)、藻红蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。

 

  1. 荧光染料在核酸检测中的应用

核酸荧光染料对细胞核染色后定量测量细胞所发出的荧光强度,就可以确定细胞核中DNA、RNA的含量,并可以对细胞周期和细胞的增殖状况进行分析。有多种荧光染料可以对细胞中的DNA或RNA染色,常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。

 

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啥是AbFluor ™荧光染料

 

AbFluor™ 是一系列高度水溶性荧光染料,具有不同荧光染料核心结构,覆盖从UV到NIR的荧光光谱,相比于其它染料有许多新颖功能,并且是一种高亮度且耐光的荧光染料,是Cy3,Alexa Fluor,FITC,TRITC,Dylight,IRDye的绝佳替代品。试剂盒中的荧光染料已预激活,可直接用于偶联实验。

 

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