特别好用的抗体/蛋白快速标记工具,你值得拥有

 

抗体或蛋白标记是指将标记物(酶,荧光素,生物素等)共价连接到抗体或其他蛋白上,与待检测物(如某些特定抗原)特异性反应形成多元复合物,并借助于荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、电子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器对试验结果直接镜检观察或进行自动化测定,可以在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上对抗原、抗体反应进行定性和定位研究或应用各种液相和固相免疫分析方法对体液中的半抗原、抗原进行定性和定量测定。目前抗体标记技术己被广泛用于医学病理学、免疫组织化学、分子生物学、生物制药等领域的分析研究与技术测定,常见的抗体标记技术包括酶标记法,生物素化标记法,荧光素标记法等。

 

常用的抗体/蛋白标记技术:

 

  1. 酶标记

通过共价键经适当方法将酶联结在抗体或蛋白上,制成酶标抗体,再借酶对底物的特异催化作用,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,这些有色产物可用肉眼、光学显微镜和电子显微镜观查,也可以用分光光度计测定,呈色反应显示了酶的存在,从而证明发生了相应的免疫反应。

 

蛋白质 - 蛋白质缀合通常用双功能接头交联剂(例如常用的SMCC)进行,交联剂的一端(通过NHS酯)与氨基酸赖氨酸和N-末端中发现的胺(-NH2)反应,另一端(通过马来酰亚胺)与氨基酸中发现的硫醇基团(-SH)反应。然而,SMCC修饰的蛋白质极不稳定并且通常是自身反应性的。

 

美国AAT Bioquest开发的Buccutite 过氧化物酶(HRP)抗体偶联试剂盒可用于直接从蛋白质,肽和含有游离氨基的其他配体制备辣根过氧化物酶(HRP)偶联物。试剂盒中提供的HRP已使用我们专有的接头Buccutite FOL预先激活,可直接用于缀合。 Buccutite FOL活化的HRP在极其温和的中性条件下容易与含有Buccutite MTA的分子反应,无需任何催化剂

 

优势:与常用的SMCC和其他类似技术相比,我们的Buccutite 生物共轭系统更易于使用,它能够以更高的效率和产量实现生物分子的更快和定量缀合。

 

辣根过氧化物酶抗体偶联试剂盒

辣根过氧化物酶(HRP)抗体偶联试剂盒(AAT-5504)工作示意图

 

  1. 生物素标记

 

亲和素与生物素都可与蛋白质(包括抗原、抗体、酶等)、荧光素等分子结合而不影响后者的生物活性,是理想的标记剂。一个抗体分子可偶联数十个生物素或亲和素分子,而亲和素或生物素分子又可与酶或荧光素结合,从而组成一个生物放大系统,显著提高检测的灵敏度。常用的有亲和素--生物素标记法(Labeled avidin biotin,LAB)、亲和素-生物素桥法(bridged avidin biotin, BAB)和亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法(avidin biotin peroxid asecomplex,ABC)。

 

美国AAT Bioquest生产的ReadiLink 蛋白质生物素偶联试剂盒(AAT-5520)可将各种生物分子标记上生物素。试剂盒使用可与IgG和其他生物分子的氨基反应的生物素琥珀酰亚胺酯进行直接标记,根据IgG分子上可用的分子量和赖氨酸残基,可以将每个IgG分子与3-6个生物素分子缀合。

 

优势:简便快捷,一小时内完成。

生物素琥珀酰亚胺酯

生物素琥珀酰亚胺酯化学结构

 

  1. 荧光标记

 

染料与蛋白质的结合要求在染料和蛋白质之间形成稳定的共价键,且在大多数条件下这种共价键不可被破坏。与蛋白质的固有荧光相比,小型有机染料在选择标记位点时具有更大的灵活性以及荧光的增强性,已广泛用于蛋白质标记中。在用适当的染料标记后,可以在各种生物过程中对蛋白质进行可视化,从而使它们可以生化检测中被定量或在细胞研究中定位。染料-蛋白质缀合物已成为研究酶活性,蛋白质相互作用,构象变化以及调节和观察特定生物学过程的非常重要的工具,已在ELISA,蛋白质印迹,流式细胞检测和细胞成像中得到广泛应用。

 

荧光标记

 

美国AAT Bioquest的ReadiLink™快速抗体标记试剂盒提供了一种便捷的方法,可以从如iFluor™染料和mFluor™染料以及其他小型有机染料等20多种荧光标记来标记抗体,标记好的抗体完美兼容荧光成像或流式细胞仪等下游检测。还提供ReadiLink™快速抗体标记试剂盒,能够将生物素和半抗原载体BSA和KLH偶联到生物分子上,应用于免疫和抗体生产。

 

ReadiLink™快速抗体标记试剂盒的优势:

 

全面 -包括标记100 µg抗体所需的所有试剂

方便 -简单的两步标记方案,不需要过柱纯化

多功能 -能分别标记的一抗、二抗以及蛋白质(> 10 kDa),标记的量大概为50-100 µg

稳定 -产生稳定结合荧光标记的抗体偶联物,用于下游基于荧光的成像或流式细胞仪应用

 

ReadiLink™快速抗体标记试剂盒选择指南:

荧光基团 可替代的荧光基团 Ex/Em (nm) 荧光成像 流式细胞 货号
 iFluor™ 350 AMCA, Alexa Fluor® 350 345/442 AAT-1220
 iFluor™ 488 FITC, Alexa Fluor®  488 491/514 AAT-1255
 iFluor™ 555 Cy3, Alexa Fluor® 555 552/567 AAT-1227
 iFluor™ 594  Texas Red®, Alexa Fluor® 594 592/614 AAT-1230
 iFluor™ 633 Cy5, Alexa Fluor® 633 638/655 AAT-1260
 iFluor™ 647 Cy5, Alexa Fluor® 647 654/674 AAT-1235
 iFluor™ 680 Cy5.5, Alexa Fluor® 680, IRDye® 700 682/701 AAT-1240
 iFluor™ 700 Alexa Fluor® 700 693/713 AAT-1245
 iFluor™ 750 Cy7, Alexa Fluor® 750 753/779 AAT-1250
 iFluor™ 790 IRDye® 800, Alexa Fluor® 790 782/811 AAT-1265
 mFluor™ Violet 420 Cascade® Blue 398/411 AAT-1105
 mFluor™ Violet 450 Pacific Blue® 403/454 AAT-1100
 mFluor™ Violet 510 414/508 AAT-1110
 mFluor™ Violet 540 Pacific Orange® 405/537 AAT-1114
 mFluor™ Blue 570 R-PE 553/570 AAT-1120
 mFluor™ Green 620 522/617 AAT-1123
 mFluor™ Red 700 APC-Alexa Fluor® 700 Tandem 657/700 AAT-1130
 mFluor™ Red 780  APC-Alexa Fluor® 750 Tandem 629/780 AAT-1131
 FITC 494/520 AAT-1299
 Cy3 555/565 AAT-1290
 Cy5 644/665 AAT-1292
 Cy7 749/776 AAT-1294

 

ReadiLink™快速抗体标记试剂盒是如何工作的?

 

ReadiLink™快速抗体标记试剂盒利用与胺反应性部分(琥珀酰亚胺酯)偶联的荧光团,这些活性染料选择性结合形成羧酰胺键的蛋白质的脂族胺。这些羧酰胺键一旦形成,将非常稳定,确保标记物和蛋白质之间不会解离。偶联并添加TQ™染色的淬灭缓冲液后,任何游离的未结合ReadiLink™标记将与淬灭剂结合并变为非荧光性。添加TQ™染色的淬灭缓冲液是关键,因为它消除了背景干扰以及色谱柱纯化步骤。

 

ReadiLink™抗体标记试剂盒包括进行两个结合反应(2 x 50 µg)的所有基本成分。每个试剂盒均可用于标记单克隆/多克隆抗体或其他蛋白质(> 10 kD)。

 

ReadiLink™抗体标记试剂盒

 

美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest,Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域,包括吸收(颜色),荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学,免疫学,细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断介绍新产品,快速的丰富各个领域的产品。

 

作为AAT Bioquest Inc.的中国区域代理,艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测领域,包括吸收(颜色),荧光和发光技术等全系列解决方案。我们也将一如既往更加努力为国内用户提供快捷、方便的高质量产品,同时更为您售前售后全面技术支持。

 

艾美捷咨询热线

每日生物评论
线粒体呼吸链复合体检测试剂盒

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen: