荧光标记CD3抗体的功能和应用

 

CD3是一种蛋白质复合物,通常在所有成熟T细胞的表面表达。它的主要功能是作为T细胞共同受体,促进细胞毒性T细胞(CD8+ T细胞)和辅助T细胞(CD4+ T细胞)的活化,并最终帮助形成获得性免疫反应。作为T细胞活化的一个组成部分,CD3已成为药物开发的一个有潜力的指标,针对CD3开发的治疗性单克隆抗体 (mAb),可作为一种自身免疫疾病和移植排斥的免疫疗法,其中最著名的就是奥昔组单抗,它被开发用于治疗1型糖尿病和自身免疫性疾病。

 

CD3蛋白质复合物

 

在流式细胞分析中,人CD3通常被用作将T细胞与其他淋巴细胞区分开来的谱系特异性标记物。CD3 对T细胞的特异性与其在T细胞发育的所有阶段均可出现结合的特性,使其成为检测健康T细胞和T细胞癌(例如白血病、淋巴瘤)的理想标志物。在免疫组织化学研究中,CD3是组织切片中T细胞的免疫组化标志物。

 

CD3介绍

目录 价值
同义词 T3、OKT3、Leu4
细胞定位 细胞膜
细胞表达 T细胞、双阴性胸腺细胞(例如 CD4- 和CD8-)、γ/δ T细胞、NKT细胞、巨噬细胞
受体类型 免疫球蛋白 (IgG) 超家族
配体 与 MHC 结合的肽抗原
相关信号通路 T细胞受体表达和T细胞信号通路
功能 T细胞标志物、T细胞受体表达和T细胞信号传导

 

CD3 蛋白复合物

由于其胞质尾短,T 细胞受体 (TCR) 缺乏在肽主要组织相容性复合物 (pMHC) I 类或 II 类分子的抗原识别时发出信号的能力。为了激活启动免疫细胞激活的必要下游通路,TCR 需要由称为 CD3 蛋白的信号分子复合物启动细胞内信号。

 

CD3结构

CD3 蛋白复合物由四个恒定链(CD3ε、CD3δ、CD3γ 和 CD3ζ)组成,它们组成一个N端细胞外域和一个跨膜结构域,并且在所有T细胞中都是相同的。N端细胞外域由两个异源二聚体结构域CD3εγ和CD3εδ 组成,跨膜结构域由单个同源二聚体CDζζ组成。

 

CD3及其在疾病中的作用

编码 CD3 亚基的基因突变可导致严重联合免疫缺陷 (SCID),这是一种罕见的常染色体隐性遗传疾病,其特征是T和B淋巴细胞分化和功能严重缺陷。CD3亚基的缺陷与以下因素有关:

  • CD3δ和CD3ε 缺失与严重的αβ细胞淋巴细胞减少相关,导致T- B+ NK+ SCID 表型。
  • CD3ε 缺失导致T细胞发育完全阻断。
  • CD3γ缺失导致部分T细胞免疫缺陷。
  • CD3ζ缺失与免疫缺陷 25和系统性红斑狼疮 (SLE) 相关。

 

组成CD3蛋白复合物多肽链CD3ε、CD3δ、CD3γ 和 CD3ζ

CD3链 相对分子量 糖基化 ITAM 的数量 基因
CD3ε 20kDa 非糖基化多肽链 1 CD3E(人染色体11带q23)
CD3δ 20kDa 糖基化多肽链 1 CD3D(人染色体11带q23)
CD3γ 25-28kDa 糖基化多肽链 1 CD3G(人染色体11带q23)
CD3ζ 17 kDa 非糖基化多肽链 3 CD247(人染色体1带q22-q25)

 

CD3 抗体

单克隆CD3抗体可结合CD3/T细胞抗原受体复合物的ε链,经常用于流式细胞和免疫荧光应用,以识别表达CD3的免疫细胞亚群。已知表达CD3表面标志物的细胞包括约60-85% 的正常外周血淋巴细胞、约65-85%的胸腺细胞以及小脑和胃壁细胞的浦肯野细胞。

在这里,我们给大家提供了各类染料标记的CD3抗体,这些抗体通过亲和层析纯化,并在最佳条件下与各种荧光团结合,首先是我们的iFluor™系列染料

  • iFluor™染料-明亮、光稳定的染料,适用于流式细胞术 (FACS)、荧光成像和体内成像应用。

 

iFluor™ 染料标记的CD3抗体

下表列出了可用于流式细胞术 (FACS) 和荧光成像的iFluor™染料标记的人CD3抗体的荧光特性。用iFluor™染料制成的偶联物具有出色的亮度和光稳定性,优于 Alexa Fluor® 偶联物和。

iFluor™ 染料标记的CD3抗体

荧光
标记
货号 Ex
(nm)
Em
(nm)
ε¹ Φ² CF 260
nm³
CF 280
nm
iFluor™350 10030010 344 448 20,000 0.95 0.83 0.23
iFluor™405 10030020 402 425 37,000 0.91 0.48 0.77
iFluor™430 10030030 433 495 40,000 0.78 0.68 0.3
iFluor™450 10030040 451 502 40,000 0.82 0.45 0.27
iFluor™488 10030050 491 516 75,000 0.9 0.21 0.11
iFluor™514 10030060 527 554 80,000 0.83 0.25 0.11
iFluor™532 10030070 543 563 90,000 0.68 0.26 0.16
iFluor™546 10030080 541 557 100,000 0.67 0.25 0.15
iFluor™555 10030090 556 569 100,000 0.64 0.23 0.14
iFluor™560 100300A0 559 571 130,000 0.57 0.048 0.069

 

Note:

  1. Ε=最大吸收波长处的摩尔消光系数(单位 = cm -1 M -1)(下同)。
  2. Φ =水性缓冲液(pH 7.2)中的荧光量子产率(下同)。
  3. 260 nm处的CF是用于消除染料对260 nm处吸光度的影响的校正因子(用于寡核苷酸和核酸标记)(下同)。
  4. 280nm处的CF是用于消除染料对280 nm处吸光度的贡献的校正因子(用于肽和蛋白质标记)(下同)。

上述每一种抗体都可以提供HIT3b,SK7,UCHT1,HIT3a,OKT-3这几种克隆号,每种克隆号对应的

 

同种型和应用类型如下:

免疫原 类型 物种反应性 宿主,同种型 克隆号 应用类型
识别 CD3ε 链 单克隆 小鼠,IgG1 HIT3b FC、IHC-F、IF
识别 CD3ε 链 单克隆 小鼠,IgG1,κ SK7 FC、IHC
识别 CD3ε 链 单克隆 小鼠,IgG1,κ UCHT1 FC、FN、IHC-F、ICC、IP、WB
识别 CD3ε 链 单克隆 小鼠,IgG2a,κ HIT3a FC、FN、IHC-F、IP
识别 CD3ε 链 单克隆 小鼠,IgG2a,κ OKT-3 FC

应用缩写说明FC = 流式细胞术;FN = 功能测定;IF = 免疫荧光;IHC = 免疫组织化学;IHC-F = 免疫组织化学(冷冻);ICC = 免疫细胞化学;WB = 蛋白质印迹;IP = 免疫沉淀。

 

除了iFluor™ 荧光团外,我们还提供以下4大类荧光标记的CD3抗体,他们分别是:

  • mFluor™染料:明亮、光稳定的染料,针对流式细胞术 (FACS) 应用进行了优化。
荧光团 Ex (nm) Em (nm) ε¹ Φ² CF 260 nm CF 280 nm
mFluor™ UV375 354 388 35,000 0.94 0.099 0.138
mFluor™ Violet 450 406 445 25,000 0.92 0.338 0.078
mFluor™ UV460 362 456 15,000 0.86 0.35 0.134
mFluor™ Violet 500 426 497 35,000 0.81 0.769 0.365
mFluor™ Violet 510 409 504 30,000 0.86 0.464 0.366
mFluor™ Violet 540 400 532 15,000 0.64 1.392 0.529
mFluor™ Blue 570 552 564 120,000 0.08 0.228 0.179
mFluor™ Green 620 521 617 50,000 0.06 0.895 0.569
mFluor™ Yellow 630 546 625 110,000 0.01 0.283 0.413
mFluor™ Red 700 657 694 250,000 0.029 0.135 0.127

 

荧光团 Ex (nm) Em (nm) ε¹ Φ² CF 280 nm
Alexa Fluor® 350 343 441 19,000 N/D 0.19
Alexa Fluor® 488 499 520 73,000 0.92 0.11
Alexa Fluor® 555 553 568 155,000 0.1 0.08
Alexa Fluor® 594 590 618 92,000 0.66 0.56
Alexa Fluor® 647 650 671 270,000 0.33 0.03
Alexa Fluor® 680 681 704 183,000 0.36 0.05
Alexa Fluor® 700 696 719 205,000 0.25 0.07
Alexa Fluor® 750 752 776 290,000 0.12 0.04

 

  • 经典染料:适用于流式细胞术 (FACS) 和荧光成像应用。
荧光团 Ex (nm) Em (nm) ε¹ Φ² CF 280 nm
Pacific Blue™ 404 455 46,000 0.78 0.2
FITC 491 516 73,000 0.79 0.254
Pacific Orange™ 400 551 25,000 N/D 0.6
TRITC 544 570 85,000 0.1 0.34

 

荧光团 Ex (nm) Em (nm) ε¹ 激光 (nm)
PE 566 574 1,960,000 488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-Texas Red® 567 615 1,960,000 488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-Alexa Fluor® 610 567 627 1,960,000 488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-Cy5® 565 666 1,960,000 488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-iFluor™ 647 569 666 1,960,000 488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-Alexa Fluor® 700 566 721 1,960,000 488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-Cy7® 566 778 1,960,000 488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-iFluor™ 750 566 778 1,960,000 488 nm, 532 nm, 561-568 nm
APC 651 660 700,000 633-647 nm
APC-iFluor™ 700 651 710 700,000 633-647 nm

 

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文章来源:CD系列抗体专题1——荧光标记CD3抗体

 

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