多文献的OZ Biosciences脂质转染试剂

基本原理：

熟知的脂质的转染技术有脂质转染（Lipofection属于生物化学方法，使用的脂质转染试剂包括聚合物、DEAE葡聚糖和磷酸钙等。脂质转染的原理是将核酸与阳离子脂质制剂结合，形成称为脂质体的分子复合物，然后被细胞摄取。脂质转染具有以下主要优点：高效性，能够在广泛的细胞类型中转染各种类型的核酸；易于使用，具有较强的可重复性；毒性较低。此外，脂质转染方法适用于各种转染应用，包括瞬时转染、稳定转染、共转染、反向转染、顺序转染或多次转染等。它还可用于高通量筛选和测定，并在一些体内模型中显示出良好的效果。

工作原理：

（1）DNA转染机制：

用于脂质转染的脂基试剂通常由合成的阳离子脂质组成，其通常与辅助脂质如DOPE（L-α-二油酰磷脂酰乙醇胺）或胆固醇混合。这些脂质混合物在生理pH值下以整体带正电荷的脂质体或胶束形式组装，并能够通过静电相互作用与带负电荷的核酸形成复合物（脂质复合物）。脂基转染试剂与核酸的结合使核酸受到紧密压缩和保护，这些阳离子复合物主要通过内吞作用内化。一旦进入细胞，有两种导致核酸释放到细胞质中的机制。一种依赖于多阳离子残基的核内体缓冲能力（称为“质子海绵效应”）。另一种是细胞带负电荷的脂质中和转染试剂的阳离子残基导致内体膜不稳定的能力。最后，导致核摄取DNA（siRNA不需要）随后基因表达的细胞和分子事件仍然是高度推测性的。然而，细胞分裂对转染效率的重要性有利于有丝分裂过程中核膜破坏促进DNA核摄取的假设。尽管如此，通过脂质转染也可以实现原代细胞（非分裂）和体内的转染，这表明DNA可以进入发生基因表达的细胞核。

（2）Tee-技术（Tee-Technology）：

阳离子脂质体（脂质复合物）和聚合物（多聚体）是最常用的非病毒基因递送系统。 Tee-Technology（触发内体逃逸）结合并利用这两种实体的特性来实现极其高效的核酸传递到细胞中。实际上，这种新一代的脂多胺含有亲脂性部分，如脂质，和带电荷的多胺部分，如阳离子聚合物。这些部分协同作用以确保核酸的紧密压缩和保护，以及核内体膜的非常有效的不稳定，这允许大量核酸在细胞质中释放和DNA的核摄取。特别关注完全可生物降解实体的合成。通过这种方式，转染试剂不会干扰细胞机制，在每次实验中都能保持高细胞活力，并避免任何潜在的副作用。

Tee-技术的主要优势在于：

• 纳米颗粒中DNA的压缩被细胞有效地内化；
• 核酸对核酸酶降解的保护作用；
• 有效的膜不稳定性和DNA递送；
• 即使在核酸含量较低的情况下也具有高效性；
• 生物降解性。

应用：

转染效率与高基因表达水平或高基因沉默和最小化细胞毒性相结合取决于多个关键参数。这些因素包括细胞类型、质粒DNA特征（大小、启动子、报告基因）和纯度、siRNA序列和纯度、细胞培养条件（含或不含血清的培养基、细胞数量、无污染......）、核酸和试剂的量、转基因检测等等。 因此，转染试剂需要根据待递送的核酸（DNA、siRNA、mRNA、ODN、shRNA等）和使用的细胞类型进行专门设计，以达到最佳效率。在此背景下，OZ Biosciences开发了几种出色的转染试剂：

DreamFect Gold：适用于所有核酸，获得卓越的转基因表达水平

DreamFect：适用于所有核酸，适用于所有细胞，包括悬浮细胞系

Lullaby：用于siRNA应用

VeroFect：用于Vero细胞转染

FlyFectin：用于昆虫细胞转染

EcoTransfect：用于流行的细胞系和低成本的常规转染

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如何使用脂质转染试剂？

该protocol是一个非常简单明了的程序，大体流程如下：

1. 制备DNA和转染试剂溶液。
2. 将它们混合在一起并孵育20分钟。
3. 添加到您的细胞中。

产品引用文章鉴赏：

1. Ferrari, R., Martin, G., Tagit, O. et al. MT1-MMP directs force-producing proteolytic contacts that drive tumor cell invasion. Nature Communications10, 4886 (2019).. （使用OZ Biosciences的Lullaby脂质转染）
2. Karousis, E.D., Gurzeler, LA., Annibaldis, G. et al. Human NMD ensues independently of stable ribosome stalling. Nature Communications11, 4134 (2020). （使用OZ Biosciences的Lullaby脂质转染）
3. Ramsay, E.P., Abascal-Palacios, G., Daiß, J.L. et al. Structure of human RNA polymerase III. Nature Communications11, 6409 (2020).  （使用OZ Biosciences的Lullaby脂质转染）

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