DNA损伤检测技术,你知道多少?

 

DNA是携带生物体遗传信息的重要分子,它的完整性对细胞存活至关重要。然而,在生命活动中,DNA时刻遭受着内源性(氧化自由基、复制叉崩塌等)或外源性(电离辐射、烷化剂等)刺激,DNA损伤不可避免。

 

 

检测DNA损伤的方法有很多,根据其原理大致可以分为3类: 基于损伤DNA理化性质的改变检测DNA损伤、基于分子杂交检测DNA损伤以及基于DNA损伤后形成的产物检测DNA损伤。前两种方法是基于荧光标记直接观测DNA的损伤情况,而基于DNA损伤后形成的产物检测DNA损伤是通过标记物的检测间接反映DNA的损伤程度。

 

检测原理 检测技术 所检测DNA损伤类型
基于损伤DNA理化性质的改变检测 彗星实验 链断裂及碱不稳定位点
基于分子杂交检测 荧光原位杂交法 链断裂
基于DNA损伤后形
成产物检测
yH2AX 链断裂
8-OHdG DNA化学修饰
TUNEL 细胞凋亡所致DNA链断裂

 

※ 基于DNA损伤后形成产物进行检测

 

DNA损伤过程中可形成某些特定的损伤产物,可通过检测损伤产物(磷酸化H2AX、8-OHdG等)来评估DNA损伤。也可标记损伤DNA,如末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL),通过标记物的检测间接反映DNA的损伤程度。

 

1.双链断裂标志物磷酸化H2AX检测法

H2AX是组蛋白H2A家族成员之一,包含一个进化保守区域SQ位于真核细胞的C末端,分子量为14KD,139位有个丝氨酸残基,在细胞发生DNA双链断裂后的数分钟内,将会被ATM,ATR和PRKDC磷酸化,形成γH2AX,进而迅速招募DNA修复蛋白和凋亡蛋白到损伤部位,每个双链的断裂区会有成百上千的γ-H2AX,然后在1h左右数量和密度达到峰值。由于γH2AX的出现与DNA双链断裂紧密关联,是目前国内外研究细胞DNA双链断裂应激反应的热点之一,同时也可以作为DNA双链断裂的标志物。

 

(1)双链断裂标志物磷酸化H2AX检测法

 

由于与DNA双链断裂紧密相关,γH2AX可以作为双链修复的标志物,艾美捷可为您提供完备的H2AX检测产品:

 

γH2AX检测试剂盒:

货号 名称 描述 规格
P-6001-096 EpiQuik In Situ DNA Damage Assay Kit
原位DNA损伤检测试剂盒
通过原位检测磷酸化H2AX Ser139评估DNA损伤 96 assays

 

H2AX&γH2AX相关抗体:

类型 货号 名称 应用
H2AX抗体 MAB20144 H2AFX monoclonal antibody, clone BIA-8 WB-Ce、IHC-P、ICC、IF、IP
MAB12802 Histone H2AX monoclonal antibody, clone RM214 WB-Ce、ICC、ELISA
PAB8764 H2AFX polyclonal antibody WB-Ce、IHC、IP
γH2AX抗体 MAB15279 Histone H2AX (phospho S139) monoclonal antibody, clone 2A9-B5 WB-Ce、IF
MAB15111 Histone H2AX (phospho S139) monoclonal antibody, clone RM224 WB-Ce、ICC、IF
MAB21809 H2AFX (phospho S139) monoclonal antibody WB、 IHC-P、 IF、 IP

 

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2.氧化损伤标志物8-OHdG检测法

DNA氧化损伤产物中,作为DNA中脱氧鸟苷(dG)的羟基加合物,8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)因其形成量大,影响因素少,已被公认为最能反映体内DNA氧化损伤程度的生物标志物。

 

氧化损伤标志物8-OHdG检测法

 

OHdG检测试剂盒:

货号 名称 规格
P-6003-48 EpiQuik 8-OHdG DNA Damage Quantification Direct Kit (Colorimetric)
8-OHdG DNA损伤定量检测试剂盒(比色法)
48 assays
P-6003-96 96 assays

 

8-OHdG相关抗体:

货号 名称 应用
MAB6116 8-OHdG monoclonal antibody, clone N45.1 IHC

3.DNA断片标记法

原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)是一种检测凋亡细胞DNA链断裂片段的方法。细胞凋亡发生时,内源性核酸内切酶将DNA降解成片段,在脱氧核苷酸末端转移酶的作用下,底物dUTP 或BrDU(无或有荧光标记)可连接到DNA断片的3-OH末端,采用荧光显微镜或流式细胞仪对标记物进行分析,实现在单细胞水平检测凋亡细胞的DNA碎片。

 

DNA断片标记法

货号 名称 样本类型
KA0773 In Situ BrdU DNA Fragmentation Assay Kit 细胞、组织
KA0775 In Situ BrdU DNA Fragmentation Assay Kit (IHC) 细胞、组织
KA0776 In Situ BrdU DNA Fragmentation Assay Kit (Red) 细胞、组织

 

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