神奇的链霉亲和素及其衍生物

 

链霉亲和素及其衍生物,与生物素类似,链霉亲和素分子本身也较小,同时也可以与生物活性大分子(例如抗体)广泛结合而不会对其功能产生影响,因而得到广泛的使用。

 

链霉亲和素

 

一、什么是链霉亲和素?

 

链霉亲和素(streptavidin下称SA)是与亲和素(avidin下称AV)有相似生物学特性的一种蛋白质,是streptomyces avidinii菌的分泌物,其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似,等电点6.0,非特异性结合远比亲和素低。

 

二、链霉亲和素来源:

 

SA 是Streptomyces avicllrdi菌培养过程中的分泌产物,主要通过2一亚氨基生物素亲和层析法提纯,1L培养液中含蛋白10~60mg 。

 

三、链霉亲和素组成

 

链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成,其氨基酸组成中,甘氨酸和丙氨酸的含量较大,而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基;链霉亲和素是一种稍偏酸性(pH6.0)的蛋白质,并且不带任何糖基。在蛋白水解酶作用下,链霉亲和素可在N端10~12和C端19-21间断裂,形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。链霉亲和素的活性单位也是以结合1μg生物素所需的量来表示,1mg链霉亲和素的最高活性可达18U。

 

四、链霉亲和素及其衍生物相关

 

  1. 酶标记的链霉亲和素结合物

 

酶标记的链霉亲和素缀合物通常用于酶联免疫吸附测定(ELISA),免疫组化(IHC),免疫印迹(WB)和原位杂交技术(FISH)。辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)因其周转率高,稳定性高,易于缀合和成本低等优点而被广泛用作报告标签。

 

酶标记的链霉亲和素结合物

FFPE肺腺癌组织中EpCAM的IHC检测:将人腺癌组织切片与兔抗EpCAM一抗随后进行生物素化的山羊抗兔IgG(H&L)孵育。然后将样品与HRP-链霉亲和素一起孵育,并使用ReadiUse™ Stayright™ Purple(Cat# 45900)进行显色。

 

2.荧光链霉亲和素缀合物

 

荧光链霉亲和素偶联物广泛用于荧光成像中,以检测生物素化的抗体,配体和DNA探针,用于原位杂交技术(FISH),免疫组织化学(IHC)和多色流式细胞术(FC)。

 

iFluor™链霉亲和素缀合物

 

用iFluor™染料标记的链霉亲和素缀合物具有异常明亮和稳定的荧光,胜过Alexa Fluor®和其他光谱相似的缀合物。iFluor™链霉亲和素偶联物设计用于多种细胞分析和蛋白质分析应用,包括成像(IF),流式细胞术(FC)和荧光免疫印迹。作为提醒,在检测低丰度靶标时避免使用蓝色荧光链霉亲和素偶联物。蓝色荧光染料具有较低的荧光,并且比其他染料具有更高的非特异性背景。

 

iFluor™链霉亲和素缀合物

HeLa细胞中α-微管蛋白的免疫荧光染色:将固定和透化的HeLa细胞中的α-tubulin与兔抗tubulin一抗一起孵育,然后与生物素化的山羊抗兔IgG(H&L)(Cat# 16794)进行孵育,然后加入iFluor™647-链霉亲和素偶联物(Cat# 16966),使用DAPI(Cat# 17507)对细胞核进行复染。

 

相关文章阅读【生物素姊妹篇——链霉亲和素及其衍生物:http://www.amyjet.com/featured/streptavidin.shtml】

 

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