【好物品鉴】—生物素衍生物产品力荐

 

生物素-链霉亲和素结合系统的广泛采用主要是由于两个因素。第一个是生物素和链霉亲和素分子本身相对较小，它可以与生物活性大分子（例如抗体）广泛结合，而不会对其功能（即抗体的结合位点）产生抗性。第二个是生物素和链霉亲和素彼此结合的特异性，以及后续键的强度，可实现强大的流线型生物测定应用。链霉亲和素四聚体对生物素具有极高的结合亲和力，解离常数（K _d）约为10 ^-14摩尔/升。这种紧密而特异性的结合是快速的，并且能够承受pH，温度，有机溶剂和变性剂的极端作用。

 

图1.链霉亲和素-生物素相互作用的图示。链霉亲和素的多价特性使其能够以高度亲和力结合多达四个生物素分子。生物素通常与酶，抗体或靶蛋白缀合。

 

生物素-链霉亲和素系统的优点

生物素-链霉亲和素系统的主要优势在于其提高检测灵敏度的能力。这在很大程度上是由于链霉亲和素的四聚体构象。一种链霉亲和素蛋白具有以高亲和力和选择性结合四个生物素分子的能力。这种多样性使得能够放大微弱的信号，并以简单的工作流程提高了对哺乳动物细胞或组织中中等和低丰度靶标的检测灵敏度。

 

另一个关键优势是生物素-链霉亲和素系统的多功能性。由于链霉亲和素可以与多种报道分子标记物偶联，因此几乎可以将其掺入每个免疫测定中。例如，链霉亲和素的酶结合物被用于酶联免疫吸附测定（ELISA）中，而荧光标记的链霉亲和素，例如iFluor™488链霉亲和素，被广泛用于细胞表面标记，荧光激活细胞分选（FACS）和其他荧光成像应用。

 

应用领域

• 酶联免疫吸附测定（ELISA）
• 免疫组织化学（IHC）
• Power Styramide™信号放大，可替代酪胺
• 免疫印迹
• 免疫荧光显微镜
• 细胞表面标记
• 亲和纯化
• 荧光激活细胞分选（FACS）
• 流式细胞仪

 

生物素

生物素是一个244道尔顿的半抗原小分子，由于它对链霉亲和素的异常强的结合亲和力通常被用来检测和监测目标生物学靶标。生物素具有两个特性，使其非常适合于生物缀合物的开发。  首先，生物素的体积相对较小。这允许将多个生物素标签标记为单个蛋白质或抗体，而不会显着阻碍其生物反应性。其次，是生物素分子的戊酸侧链。该链可被衍生化，以促进用于化学标记生物素的各种反应基团结合到蛋白质上，而不会改变生物素对链霉亲和素的结合亲和力。

 

特色产品

• 荧光生物素衍生物
• 生物素化二抗
• 生物素化核苷酸
• 生物素化氨基酸
• 活性生物素衍生物
• ReadiLink™蛋白质生物素化试剂盒
• Amplite™比色生物素定量试剂盒

 

1. 荧光生物素衍生物

荧光生物素衍生物在同一分子中同时包含荧光团和生物素部分。这些试剂用于通过荧光检测和定量生物素结合蛋白。与链霉亲和素与荧光生物素结合相关的强烈淬灭可用于精确测量链霉亲和素（或抗生物素蛋白）的浓度。

 

表1.荧光生物素衍生物

注意：

Ext. Coeff. = 在其最大吸收波长处的摩尔消光系数（单位= cm ^-1 M ^-1）。

FQY = 在水性缓冲液（pH 7.2）中的荧光量子产率。

 

2.生物素化二抗

 

我们提供生物素化的二抗，可与基于链霉亲和素的扩增技术一起使用。使用生物素化的二抗的主要优势在于，只需简单地使用不同的链霉亲和素偶联物，即可在各种应用中灵活使用相同的生物素化二抗。

 

图2 HeLa细胞中α-微管蛋白的免疫荧光染色

 

表2.生物素化二级抗体的可用产品

 

3. 生物素化核苷酸

可以将生物素修饰的三磷酸核苷类似物（例如dUTP和dCTP）通过酶法掺入DNA或RNA片段中，以用于荧光原位杂交（FISH），DNA阵列，微阵列和其他杂交技术。标准的酶促非放射性DNA标记反应包括3'-末端标记，cDNA标记，Nick翻译，PCR和随机引物标记。每个生物素化的核苷酸在生物素及其在核苷酸上的连接点之间包含11、14、16或20原子的间隔区间。这有助于通过荧光团和酶标记的链霉亲和素结合物或琼脂糖磁珠进行检测和信号放大。

 

表3. 生物素化核苷酸

 

4. 生物素化氨基酸

生物素化的肽适用于需要固定在链霉亲和素或抗生物素蛋白包被的微量滴定板，珠子或膜上的免疫检测研究和生物医学筛选分析。在Fmoc固相合成过程中，生物素可与肽段的N末端或赖氨酸（Lys），谷氨酸（Glu）或天冬氨酸（Asp）的侧链相连。FMOC-Glu（生物素-PEG）-OH和FMOC-Asp（生物素-PEG）-OH中的PEG-间隔物的比例降低，可降低目标肽和链霉亲和素之间的空间位阻，从而获得更好的生物素结合。PEG-间隔基的亲水性质使非特异性作用最小化，并提高了试剂和生物素化肽的溶解度。

 

表4. 生物素化氨基酸

 

5. 反应性生物素衍生物

反应性生物素衍生物包含反应性基团，例如琥珀酰亚胺酯或马来酰亚胺，它们有助于将生物素标记到蛋白质，抗体和其他大分子上。选择反应性生物素衍生物时，请注意以下事项：

 

官能团靶向 -特定的反应性部分靶向并结合到它们各自的官能团上，以进行蛋白质和其他大分子的靶向或非选择性生物素化（例如琥珀酰亚胺酯靶向伯胺，马来酰亚胺靶向巯基或巯基）。

溶解度 -这会影响目标蛋白质或大分子的生物素化。

间隔臂长度（PEG） -提高目标蛋白的检测灵敏度并减少空间位阻

 

表5. 反应性生物素化试剂

 

6. ReadiView™生物素化试剂

想要确定蛋白质的生物素化程度非常具有挑战性，因为很难从蛋白质和核酸中分辨出生物素的内在吸收。为便于确定，我们提供了一系列能进行显色反应的Boitin衍生物ReadiView™生物素。这些新型的生物素化试剂包含经过特殊设计的“颜色标签（CT）”，该标签最佳地位于两个间隔臂之间。这些间隔臂可减少空间位阻并改善水溶性，而CT标签可通过计算280 nm / 385 nm的吸收率来量化生物素化程度。CT标签不影响生物素与链霉亲和素的结合，对荧光链霉亲和素结合物的猝灭作用极小。ReadiView™生物素具有胺反应性，硫醇反应性和点击化学(Click chemistry)形式。

 

图3. 与专门设计的颜色标签（Color Target）结合的ReadiView™生物素琥珀酰亚胺酯（货号：3059），使其易于确定样本生物素化程度。

 

表6. ReadiView™生物素产品

 

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