生物素姊妹篇——链霉亲和素及其衍生物

 

前情回顾：好物品鉴，生物素及其衍生物产品力荐

 

上一期我们给大家介绍了目前在生化实验中被广泛使用的生物素-链霉亲和素结合系统，以及其中的第一个成员——生物素及其衍生物以及他们的一些常规的应用，今天给大家带来了该系统中另外一个重要的成员——链霉亲和素及其衍生物，与生物素类似，链霉亲和素分子本身也较小，同时也可以与生物活性大分子（例如抗体）广泛结合而不会对其功能产生影响，因而得到广泛的使用。为方便大家的研究工作，今天就给大家带来了全套的链霉亲和素及其衍生物相关产品。

 

1. 酶标记的链霉亲和素结合物

酶标记的链霉亲和素缀合物通常用于酶联免疫吸附测定（ELISA），免疫组化（IHC），免疫印迹（WB）和原位杂交技术（FISH）。辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP）因其周转率高，稳定性高，易于缀合和成本低等优点而被广泛用作报告标签。

 

为了最大程度地保留酶和蛋白质活性，我们的HRP-链霉亲和素和AP-链霉亲和素偶联物的标记比例为1：1（酶对链霉亲和素）。显色，荧光和化学发光的底物均可用于这些酶结合物。

 

 

FFPE肺腺癌组织中EpCAM的IHC检测：将人腺癌组织切片与兔抗EpCAM一抗随后进行生物素化的山羊抗兔IgG（H＆L）孵育。然后将样品与HRP-链霉亲和素一起孵育，并使用ReadiUse™ Stayright™ Purple（Cat# 45900）进行显色。

 

2. HRP底物：

 

3. AP-链霉亲和素缀合物及底物：

 

4. 荧光链霉亲和素缀合物

荧光链霉亲和素偶联物广泛用于荧光成像中，以检测生物素化的抗体，配体和DNA探针，用于原位杂交技术（FISH），免疫组织化学（IHC）和多色流式细胞术（FC）。我们提供了一系列完整的荧光链霉亲和素标记，这些荧光素标记有iFluor™染料，mFluor™染料，藻胆蛋白和串联染料等。我们的iFluor™链霉亲和素偶联物的优势包括：具有异常明亮的荧光，出色的光稳定性和对pH值不敏感等特性。

 

iFluor™链霉亲和素缀合物

用iFluor™染料标记的链霉亲和素缀合物具有异常明亮和稳定的荧光，胜过Alexa Fluor®和其他光谱相似的缀合物。iFluor™链霉亲和素偶联物设计用于多种细胞分析和蛋白质分析应用，包括成像（IF），流式细胞术（FC）和荧光免疫印迹。作为提醒，在检测低丰度靶标时避免使用蓝色荧光链霉亲和素偶联物。蓝色荧光染料具有较低的荧光，并且比其他染料具有更高的非特异性背景。

 

 HeLa细胞中α-微管蛋白的免疫荧光染色：将固定和透化的HeLa细胞中的α-tubulin与兔抗tubulin一抗一起孵育，然后与生物素化的山羊抗兔IgG（H＆L）（Cat# 16794）进行孵育，然后加入iFluor™647-链霉亲和素偶联物（Cat# 16966），使用DAPI（Cat# 17507）对细胞核进行复染。

 

①. 用于成像和流式细胞术的iFluor-链霉亲和素缀合物：

 

 

②. mFluor™链霉亲和素偶联物用于流式细胞术：

用mFluor™染料标记的链霉亲和素偶联物具有最小的自发淬灭，可为流式细胞仪产生强烈的荧光和稳定偶联物。mFluor™链霉亲和素偶联物设计用于通过流式细胞仪中常用的主要激光线之一（例如405 nm，488 nm，532 nm，561 nm或633 nm激发光）进行最佳激发。

 

用（红色）或不用（绿色）1ug / ml生物素标记的抗人HLA-ABC的HL-60细胞的流式细胞分析，然后添加mFluor™Blue 570-链霉亲和素偶联物（Cat# 16935）。

 

用于流式细胞术的mFluor™链霉亲和素缀合物：

 

③. 链霉亲和素APC，PE，PerCP组成串联染料偶联物用于流式细胞术：

链霉亲和素PE，APC和PerCP偶联物通常用于需要高灵敏度但不需要光稳定性的应用中，主要是流式细胞，FACS，免疫表型和微阵列。藻胆蛋白异常明亮的荧光是由于它们异常高的消光系数和量子产率。

 

串联染料偶联物是将供体藻胆蛋白（例如APC或PE）标记到受体iFluor™染料上，后者在较长波长下发出荧光。使用荧光共振能量转移（FRET），供体藻胆蛋白吸收的光导致受体的荧光发射。在流式细胞仪中，串联染料非常适合用于细胞的多色参数分析，这是因为它们利用的是单个激发光源并且其斯托克斯位移（Stokes shifts）非常大。

 

用于流式细胞的链霉亲和素APC，PE，PerCP和串联染料偶联物：

 

④. 链霉亲和素-Xtra™缀合物：

链霉亲和素-Xtra™iFluor™偶联物可用于细胞成像，流式细胞(FC)和蛋白质印迹(WB)等应用中生物素化抗体的检测，从而产生最亮的荧光。与传统的AlexaFluor^®链霉亲和素缀合物相比，Xtra™iFluor™链霉亲和素缀合物可对低丰度目标蛋白进行成像，具有更高的灵敏度和细节。

 

链霉亲和素-Xtra™缀合物优点：

• 明亮且稳定的荧光，无明显的自发淬灭
• 较高的信噪比：与AlexaFluor®相比，信号改善了3-5倍
• 在较宽的摩尔范围荧光内不受pH影响

 

用链霉亲和素-Xtra™IF488和链霉亲和素-AlexaFluor®488染色的HeLa细胞的比较

 

链霉亲和素-Xtra™缀合物：

 

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