蛋白互作知识第二弹——Pull-Down

 

上一期,小编给大家带来了《干货|运用IP“鱼钩”垂钓,蛋白总会“愿者上钩”》,反响非常热烈。在大家的呼声中,小编正在快马加鞭翻阅曾经的实验笔记,为大家带来了蛋白互作知识的第二弹——Pull-Down。如果把蛋白互作比作是一次兴趣盎然的“钓鱼”活动的话,那我们用的Purekine填料就是一个坚韧又细长的“鱼竿“和”鱼线“,已知的GST标签重组蛋白是锐利而坚挺的“鱼钩”与“鱼饵”的完美结合,而我们的目标蛋白就是那个在水里自由灵动的“鱼儿”了。

 

Pull-Down的概念与Co-IP类似,其目的是研究与已知诱饵蛋白结合的蛋白或配体。Pull-Down旨在证明两种蛋白质之间的相互作用或探索可与目的蛋白结合的未知蛋白或分子。Pull-Down不同于IP或Co-IP之处在于,它不是基于抗体-抗原相互作用,不是免疫反应。诱饵蛋白(或配体),通过非抗体亲和系统固定到固相支持物上,这种固定可以通过共价偶联结合到活化的微珠上,也可以通过与支持物上的受体分子结合的亲和标签结合,从而固定。例如,固定化金属螯合亲和层析(IMAC)树脂,可用于组氨酸标签诱饵蛋白的Pull-Down。Pull-Down的优化需要考虑所采用的亲和系统的特殊性质。Pull-Down的原理根据以下示意图,大家就会一目了然:

 

而Pull-Down所获得的捕获蛋白的分析方式,如下图所示:

 

Pull-Down与蛋白纯化实验的对比:

 

运用重组基因表达蛋白,再进行下游的蛋白的提取和纯化实验:

 

1.两种实验步骤的异同点解析:

实验类型 Pull-Down 蛋白纯化
固相载体 亲和层析树脂 亲和层析树脂填料
载体形态 散装 装柱
孵育方法 摇床孵育 纯化柱内孵育
使用缓冲液液 Binding BufferWash Buffer
Elution Buffer
Binding BufferWash Buffer
Elution Buffer
靶蛋白形式 捕获蛋白 重组蛋白

 

2.需要实验到的产品类型:

产品种类 货号
His 标签蛋白纯化工具 BMR20000
GST 标签蛋白纯化工具 BMR20100
MBP 标签蛋白纯化工具 BMR20206
Flag 标签蛋白纯化工具 BMR21504
Biotin 标签蛋白纯化工具 BMR20306
Protein A抗体纯化工具 BMR21604
Protein G抗体纯化工具 BMR20600
Protein A/G抗体纯化工具 BMR20704
Protein L抗体纯化工具 BMR20800

结语

 

亚科因(Abbkine)公司提供的蛋白纯化工具Purkine系列产品的多功能的,适用于多种蛋白学实验。当您的目的蛋白是重组蛋白时,纯化填料可以用于重组蛋白的提取,即为蛋白纯化实验;当您的目的蛋白是与重组蛋白互作的捕获蛋白时,该系列产品可以用于捕获蛋白的提取和纯化。

 

本期主要讲的是Pull-Down的知识,时间有限,小编又得跟大家说再见了。下期同一时间,我们还有精彩内容与大家见面。敬请期待~~~~~

 

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