当我们需要少量地富集蛋白,并进行单一检测时,IP实验成为蛋白学研究伙伴们地不二之选。
当我们需要证明蛋白间相互作用时,Co-IP几乎是必做项目。利用细胞裂解样本,证明胞内蛋白的相互作用,阐明现象后的分子机制。
Co-IP实验简而言之,就是一场爱的追捕小游戏,抗体捕获蛋白(抗原),珠子捕获抗体-抗原复合物。现在,如果把珠子与抗体-抗原复合物“绑定”在一起,那么IP/Co-IP实验将会省去 “追爱”过程中许多繁杂的步骤。小编带你梳理传统IP/Co-IP实验与优化升级后的IP/Co-IP实验的步骤和注意点,让你在这场爱的追逐中立于不败之地。
传统IP和Co-IP基本步骤:
- 添加合适的抗体。
- 抗体与目标蛋白结合。
- 添加Protein A/G使抗体-蛋白质复合物不溶。
- 溶液离心分离抗体-蛋白质复合物。
- 去除上清液并洗涤。
传统ProteinA/G在IP应用的局限性:
- 耗时
- 当抗体种属、亚型和ProteinA/G不匹配时,ProteinA/G和抗体结合能力弱
- 和样本中的其他免疫球蛋白结合,产生非特异性结合,导致高背景
升级之后的IP和Co-IP基本步骤:
- 添加合适的抗体偶联物。
- 抗体与目标蛋白结合。
- 溶液离心分离抗体-蛋白质复合物。
- 去除上清液并洗涤。
用了我们升级之后的琼脂糖/磁珠偶联标签抗体之后,我们可以很惊奇地发现,实验过程省去了一个耗时而且复杂的抗体与载体结合的实验操作,而且抗体与Beads的完美结合,提高了目标蛋白被“拉”下来的精准性,得到的靶蛋白纯度和产量都会明显提高,而且操作简便,省时省力!
说到这里,大家对咱们Abbkine的升级产品肯定已经迫不及待了,小编现在非常自豪地把我们的琼脂糖/磁珠偶联标签抗体隆重地推荐给大家:
货号 | 名称 | 运用 |
A02010AGB | Anti-DDDDK Tag Mouse Monoclonal Antibody, Agarose) | IP/Co-IP |
A02010MGB | Anti-DDDDK Tag Mouse Monoclonal Antibody, Magnetic Beads) | IP/Co-IP |
A02040AGB | Anti-HA Tag Mouse Monoclonal Antibody, Agarose | IP/Co-IP |
A02040MGB | Anti-HA Tag Mouse Monoclonal Antibody, Magnetic Beads | IP/Co-IP |
A02050AGB | Anti-His Tag Mouse Monoclonal Antibody, Agarose | IP/Co-IP |
A02050MGB | Anti-His Tag Mouse Monoclonal Antibody, Magnetic Beads | IP/Co-IP |
A02060AGB | Anti-Myc Tag Mouse Monoclonal Antibody, Agarose | IP/Co-IP |
A02060MGB | Anti-Myc Tag Mouse Monoclonal Antibody, Magnetic Beads | IP/Co-IP |
A02170AGB | Anti-V5 Tag Mouse Monoclonal Antibody, Agarose | IP/Co-IP |
A02170MGB | Anti-V5 Tag Mouse Monoclonal Antibody, Magnetic Beads | IP/Co-IP |
同时,在IP-WB实验过程中,有一个一直困扰着咱们的难题,当靶蛋白分子量接近25KD或者50KD时,抗体重链或者会严重干扰咱们靶蛋白的观察。这个时候应该如何消除抗体重链或者轻链的干扰呢?下面为大家解析一下重链轻链的由来和应对方法:
- 如果目的蛋白分子量接近于50kDa,为了避免抗体重链的杂带干扰,推荐使用轻链特异性的二抗;
- 如果目的蛋白分子量接近于25 kDa,推荐使用重链特异性的二抗,从而避免IgG轻链的杂带干扰。
货号 | 名称 | 功能 |
A25012 | IPKine™ HRP, Goat Anti-Mouse IgG LCS | 避免重链干扰 |
A25022 | PKine™ HRP, Mouse Anti-Rabbit IgG LCS | 避免重链干扰 |
A25112 | IPKine™ HRP, Goat Anti-Mouse IgG HCS | 避免轻链干扰 |
A25222 | IPKine™ HRP, Goat Anti-Rabbit IgG HCS | 避免轻链干扰 |
A25122 | IPKine™ HRP, Mouse Anti-Rabbit IgG HCS | 避免轻链干扰 |
注:二抗预先经过其它物种血清吸附,可有效避免抗体与样本的交叉反应。
比如二抗预先经过人血清吸附,相当于在抗体制作过程中,该二抗可能与人样本结合的位点已经被结合,如果此时客户的样本是人,那么该二抗就能有效避免和人样本再发生交叉反应。
值得一提的是,IPkine二抗特点优越,让使用者放心:
- 更干净的背景,更清晰的条带,卓越的信噪比;
- 完美避免抗体重链或者轻链的干扰问题;
- 操作简便,无需额外的试剂和操作步骤;
- 经特殊化处理,与其它种属的IgG分子交叉反应极低;
- 小包装即用型试剂,极具性价比。
最后,为了满足广大粉丝的需求,在Abbkine研发专家的持续努力下,我们推出了两款通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱, 直击传统的IP/Co-IP实验痛点,让IP/Co-IP实验化繁为简、高效便捷,满足您不同的实验需求,助力您的蛋白学研究事业。
货号 | 名称 | 运用 |
KTD104-CN | 通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱(磁珠) | IP/Co-IP |
KTD105-CN | 通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱(琼脂糖) | IP/Co-IP |
该系列新品,亮点显著,细致入微的设计让人惊叹:
- 便捷、通用:包含IP 和 Co-IP 实验所需的必备试剂组分,优化的变性及非变性裂解液,可同时满足样本 IP/Co-IP 或 WB 需求;
- 可靠、稳定:包含即用型IP negative control,可排除 IgG 本身和目的蛋白或其它特定生物分子的非特异性结合,确保 IP 抗体的特异性;包含独特的 IPkineTM 二抗,完美消除重链干扰;
- 高效:高效的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率,节省抗体用量。
如图所示,通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱组分设计巧妙,可见一斑:
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