Countstar Rigel全自动荧光细胞分析仪了解下？

 

在前面的《浅谈流式细胞仪的工作原理和应用》和《Celigo全视野细胞成像分析仪的优势》等文章中，我们给大家简单介绍了流式细胞仪和Celigo全视野细胞成像分析仪这2种用于细胞分析的仪器，今天我们再给大家介绍一款同样用于细胞实验的仪器-Countstar Rigel全自动荧光细胞分析仪。

 

Countstar Rigel 全自动荧光细胞分析

 

一．Countstar Rigel 全自动荧光细胞分析仪简介

 

Countstar Rigel 全自动荧光细胞分析仪是一款基于图像法检测，配合多荧光通道，通过采集图像中的细胞信息，进行定量分析。它将荧光显微成像与统计学群体分析结合于一身，既能提供细胞群的统计数据，又可以获得单个细胞的图像，从而提供细胞形态学信息。独特的图像采集系统同时产生明场以及四张荧光图像，让实验结果更为直观。

 

明场分析外加4个荧光激发光，多至13种荧光分析，染料选择不再受限。细胞活率、凋亡、转染、周期等细胞图像和分析结果同时呈现在显示屏上。一体机设计，预置检测程序，FCS类流式软件分析（选配），从操作到分析带给您全新体验。“定焦”的专利设计，避免人为调焦带来的误差，荧光定量更加准确。

 

此外，Countstar® Rigel 满足欧盟CE认证，可按照客户的应用开发检测试剂、程序及仪器，实验操作快捷方便，为荧光细胞分析提供整体解决方案。

 

二．Countstar Rigel 全自动荧光细胞分析仪优势

 

1.自动化多荧光同步检测，最多可达13种荧光组合-最多4个激发光加5个检测器滤光片组合，可检测多达13种荧光通道；

2. 全自动光路切换，单次实验可同时检测明场加4个荧光通道，多通道的组合搭配为荧光研究应用提供了更大的灵活性；
3. 触屏一键检测，无需专人维护，极低的使用成本。一玻片5样本槽设计，每样本仅需20μL;10英寸工业级多点触屏，即使带着手套也可灵活操作，内设多种实验类型，一键完成检测需求。
4. 专利软件与硬件设计，保证稳定准确的细胞分析。FCS Express系列软件是De Novo公司开发的一款对细胞荧光图像进行量化分析的软件。FCS Express可以进行单细胞/多细胞分析参数设定和细胞图像分析，特别是在Countstar® Rigel 与FCS Express联用可以对细胞周期进行分析，帮助使用者获得更多的分析结果。
5. LED冷光源激发，光源寿命长且免维护
6. 使用高精度140万像素CCD，真实反映细胞形态和荧光强度。专利图像识别技术，智能细胞分割。单一细胞识别20+种参数，细节一览无余。
7. 大样本采样量减少统计学误差，带来准确的细胞分析结果。
8. 对光学系统进行了优化并独创了“定焦”设计。无论何时都不需要调焦：更换玻片、更换样本槽位、不同视野，避免了手动调焦可能带来荧光数值变化。这使信号强度数值真实的反应了细胞荧光分布状态，不受人为的干扰。
9. 软件可对用户权限进行四级管理和分配，保安全性。数据库管理系统，记录和存储原始图片、数据、操作参数等信息，方便数据查询与管理，保证数据的可追溯性。
10. 可以提供相关耗材以及服务以帮助用户进行仪器验证认证和校准Beads。 CountstarRigel 可为客户提供基于 GMP规范要求的IQ/OQ/PQ验证服务及标准品，以保证用户的数据是在规范要求的条件下获得。

 

三．Countstar Rigel 全自动荧光细胞分析仪应用举例

 

（一）.Countstar Rigel在脂肪干细胞研究中的应用

 

1. 细胞浓度、活率计数

Countstar Rigel可同时进行台盼蓝及AOPI两种方法计数，确保不同状态的脂肪干细胞计数结果准确性。对于状态差的样本，台盼蓝计数的细胞图片中，出现许多台盼蓝染色非常浅的类似空泡状的细胞，这些细胞对样本死活的判断常常会比较主观、容易误判。AOPI方法可以很好解决这个问题。所以建议对于不同状态的的样本可根据需求采用两种方法计数结果正准确。

 

2. 脂肪干细胞细胞表型鉴定

细胞密度、生长代数10代以内生物学特性基本保持不变，3代以上细胞表型标志物表达量下降，所以脂肪干细胞表型鉴定是非常重要的。主要包括细胞形态及CD分子标志物的鉴定。对于脂肪干细胞表型鉴定，countstar Rigel不仅可以为大家提供清晰可靠的细胞图片，同时可以结合FCS express类流式分析软件得到可靠的类流式数据分析，从而满足大家的需求。

 

（二）.Countstar® Rigel在免疫治疗领域的应用

 

免疫疗法，如CAR-T治疗包括从病人收集外周血单核细胞（PBMC），然后分离所需的T细胞亚群，通过基因改造产生工程CAR-T细胞，CAR-T细胞在体外大规模扩增后再回输到患者。 Countstar Rigel系统可以对整个CAR-T生产过程中细胞浓度，活率进行监测，并且符合GMP的要求。

 

1.AO/PI双荧光法检测活率：

吖啶橙和碘化丙啶是可以和细胞核核酸结合的荧光染料。AO可以穿透活细胞和死细胞对细胞核进行染色并发出绿色荧光，PI进入死细胞对细胞和进行染色并发出红色荧光。因此AO/PI为细胞核染料，可以准确区分活细胞与死细胞，而且可以排除杂质或者非特异细胞的干扰，进行精准的浓度活率检测。

 

 

2. 细胞毒性检测

对靶标细胞用无毒的无放射性的钙黄绿素进行标记（或者GFP转染标记），我们可以观察CAR-T细胞对肿瘤细胞杀伤效应。活的肿瘤细胞会含有钙黄绿素或者GFP，死的肿瘤细胞不含有钙黄绿素或者GFP。Hoechst33342被用来染色所有的细胞（包含T细胞和肿瘤细胞），PI用来染色所有的死细胞（包含T细胞和肿瘤细胞）。这种染色策略可以让我们对细胞进行精准的区分。

 

 

E：T比率对K562的细胞毒性研究

随着E：T比率增加，所得荧光图像显示Hoechst + CFSE + PI +靶细胞的增加

 

 

3.细胞凋亡：

细胞凋亡的测定是通过测量细胞早期凋亡激活的标记来了解细胞如何死亡。这些是凋亡细胞的特定生物化学和形态学标记，而在正常细胞和坏死细胞中不发生的此变化。使用Countstar FL通过Hoechst 33342，AnnexinV-FITC，PI标记细胞, 可以将细胞分成不同的阶段。该Counstar软件可以通过直接计数提供即时结果。

 

 

4.GFP转染

GFP可通过转基因技术引入动物细胞或其他微生物。 Countstar Rigel S3为检测GFP转染提供了一种快速简便的检测方法。用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）染色来确定总细胞群和死细胞群以及检测表达GFP的群体。该软件可以通过直接计数给出即时结果（包括GFP阳性百分比，浓度和活率）

 

5.台盼蓝细胞浓度和活率分析

Countstar® Rigel也可以通过台盼蓝染色法对细胞进行活率和浓度的测定。