身体健康的指示灯——总抗氧化能力的检测

 

抗氧化是指抗氧化自由基的简称,英文:Anti-Oxidant。生命机体防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在着紧密的联系,该防御体系有抗氧化酶类物质和非酶抗氧化物质两个体系。抗氧化酶类物质是与活性氧(ROS)相关的酶;非酶抗氧化物质中主要为维生素、氨基酸和金属蛋白质。活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羟基自由基、超氧阴离子和过氧化氢。在细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧,同时一些环境因子例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等也可以诱导活性氧的产生。活性氧产生后,可以导致生物膜、蛋白和DNA等的氧化损伤,诱发氧化应激,继而导致各种肿瘤、动脉硬化、肝损伤、糖尿病、感染、心脑血栓等疾病。

 

生命机体中存在多种抗氧化物,例如:SOD,CAT,GSHPx,G6PD,GR,谷胱甘肽等,可以清除体内产生的各种活性氧,以阻止活性氧诱导的氧化应激的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。因此测定血浆、血清、尿液、细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力对于解释生命机体的各种生理、病状等有着重要的意义。

 

血浆、血清、尿液、细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力测定

 

为您推荐简单,方便的Abbkine  CheKine™ 总抗氧化能力检测试剂盒.

 

产品名称 货号 检测方法 规格/价格
CheKine™ 总抗氧化能力(TAC)检测试剂盒 KTB1500 Ferric Reducing Ability of Plasma(FRAP法) 48T 200元
96T 300元
480T 900元

 

CheKine™ 总抗氧化能力检测试剂盒检测原理:

 

FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tripyridyltriazine(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ,随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。

 

多样本适用:血清,血浆,细胞上清,组织/细胞裂解液和其他生物液体

 

CheKine™ 总抗氧化能力检测试剂盒组份:

 

  • 实验缓冲液(10X)
  • 底物稀释液
  • 底物
  • 反应缓冲液
  • FeSO4• 7H2O 标准品
  • 抗坏血酸(阳性对照)

 

产品特点:

  • 采用较强的抗氧化剂,以抗坏血酸为阳性对照,代替常用的Trolox。
  • 反应在酸性条件下进行,可以抑制一些内源性干扰因素。

 

操作流程:

 

请按下表配置溶液

试剂 样品 标准品 阳性对照
底物稀释液 150ul 150ul 150ul
底物 15ul 15ul 15ul

混合

反应缓冲液 15ul 15ul 15ul
样本 10ul
标准品 10ul
阳性对照 10ul

 

溶液配置好后,在室温孵育5分钟,在593nm波长下,用分光光度计或酶标仪测定吸光值。

 

结果计算:

 

1.根据样品的蛋白质浓度

 

TAC(U / mg)=(CS标准×VS标准)×(OD​​样本 — OD空白)/(OD标准 — OD空白)/(V样本×C蛋白)/ T.

= 0.6×(OD样本—OD空白)/(OD标准品—OD空白)/ C蛋白

 

2.根据样品的重量

 

TAC(U / g)=(CS标准×VS标准)×(OD样本 —OD空白)/(OD标准 — OD空白)/(W×V样品 / V分析缓冲液)/ T.

= 0.6×(OD样本—OD空白)/(OD标准品—OD空白)/ W.

 

3.根据细胞或细菌的数量

 

TAC(U / 104)=(CS标准×VS标准)×(OD样本 —OD空白)/(OD标准 — OD空白)/(N×V样本 / V分析缓冲液)/ T.

= 0.6×(OD样本—OD空白)/(OD标准品—OD空白)/ N.

 

4.根据血清,血浆的体积

 

TAC(U / mL)=(CS标准×VS标准)×(OD样本 —OD空白)/(OD标准 — OD空白)/ V样本/ T

= 0.6×(OD样本—OD空白)/(OD标准品—OD空白)

C蛋白:蛋白质浓度,mg / mL;

C标准品:标准品浓度,3 mmol / L =3μmol/ mL;

W:样品重量,g;

N:细胞或细菌的数量,N×104;

V标准品:标准体积,0.01 mL;

V样品:样品体积,0.01 mL;

V分析缓冲液:分析缓冲液的体积,1 mL。

T:反应时间,5分钟。

 

注意事项:

 

  • 检测范围:0.15-3 mM
  • 建议对样品设置几个稀释度,以确保读数在标准值范围内。
  • 为保证实验效果,使用新鲜样本是必要的。如果不立即检测,样品可以在-80℃保存一个月。
  • 不能使用EDTA作为血浆样品的抗凝血剂。样品中不应含有DTT、巯基乙醇、吐温、Triton、NP-40。
  •  TPTZ底物对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。

 

标准曲线:

 

t-aoc标准曲线

Y轴: OD593,X轴: Fe2+ 浓度 (mM)

 

Abbkine专注于免疫学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。在这里,我们为您呈献蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

 

About Abbkine Scientific Co., Ltd.

Abbkine Scientific Co., Ltd.成立于2012年。我们的使命,通过为全球科学家提供人类和动物健康研究所需的基础研究工具,以期成为研究探索的关键推动者。我们将通过明确的核心战略和促进诚信、开放、合作、创新和为客户服务的企业文化,为全球生命科学研究者提供买得起的高品质产品,实现我们的使命。

 

每日生物评论

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen: