研究蛋白翻译后修饰(PTM),这个试剂盒真好用

 

翻译后修饰(PTMs)之于蛋白质,就像七十二变之于孙悟空。翻译后修饰是对蛋白质的动态、严格调节的改变,它通过调节蛋白质的结构、空间定位和互作、从而控制其功能,PTMs主要包括磷酸化、甲基化、乙酰化(Ac)、泛素化(Ub)、SUMO1或2/3等方式,但还有许多其它的,PTMs的错误调节与癌症、心力衰竭、神经和代谢性疾病等的进展有关。

 

翻译后修饰(PTMs)

 

蛋白质发生PTM后,会显著改变蛋白的理化及构象,从而直接改变蛋白的结合能力与功能。因此,即使蛋白的表达水平没有改变,但如果翻译后修饰的状态发生改变,蛋白的功能也会显著变化。最终,PTM实现了蛋白质功能的指数级扩增

 

PTM对蛋白功能影响是多样性的,表现在以下三个方面:(1)同一蛋白质,即使只发生一种类型的修饰,也会赋予其多种功能;(2)同一个蛋白的同一种翻译后修饰,如果发生在不同的氨基酸上,其功能也不同;(3)同一蛋白还可能具有不同的修饰,其功能和参与的生物过程就更为复杂。下图以intermediate filament protein(IF蛋白)为例:

 

IF蛋白

NatureReviews Molecular Cell Biology 15, 163–177 (2014)

 

IF蛋白的各种修饰与功能

 

蛋白修饰及功能的多样性是维持机体复杂精准调控的基础,但同时也给研究PTM的科研人员的研究造成了很多的困扰,为什么蛋白质翻译后修饰的鉴定难度要远远高于未发生修饰的蛋白质的鉴定了,主要有以下几点:

 

1.发生翻译后修饰的蛋白质样本量相对较少

 

2.发生修饰时形成的共价键非常不稳定,且处于动态变化中

 

3.修饰与未修饰的蛋白及多种修饰形式的蛋白常混合存在

 

针对于这些困扰,Cytoskeleton公司开发了一款名为 Signal-Seeker™ 的试剂盒,用于分析各种蛋白翻译后修饰的情况:如赖氨酸乙酰化、泛素化、SUMO化、磷酸化等修饰的鉴定及各种修饰的上调下调表达。

 

Signal-Seeker™试剂盒使用亲和磁珠从任何给定的细胞或组织裂解液中提取并富集修饰蛋白。然后通过标准的Western blot程序分析浓缩蛋白群,最终用户使用自身的抗体检测所需的修饰蛋白,Signal-Seeker™试剂盒检测流程如下图:

 

Signal-Seeker™试剂盒检测流程

 

Signal-Seeker™试剂盒的特点和优势:

 

1.Signal-Seeker™试剂盒配套相应的抗体,能对任意蛋白的转录后修饰进行研究。

 

2.Signal-Seeker™试剂盒提供通用的裂解过滤系统及定量工具,能轻松从给定的细胞或组织裂解液中提取蛋白并进行总蛋白的定量。

 

3.Signal-Seeker™亲和磁珠,富集效果无与伦比,配合控制磁珠,提供PTM蛋白提供精准定量。

 

4.Signal-Seeker™亲和磁珠可用于捕获PTM修饰的蛋白,然后用于进行进一步的分析(如Western blot和质谱检测)。

 

5.关键的去修饰化抑制剂,防止检测过程中的去修饰。

 

6.Signal-Seeker™ kit可以用于研究多重PTM的串扰(例如目标蛋白的泛素化和乙酰化)。

 

7.市面上最全面的PTM套件:包括通用裂解过滤系统、蛋白质定量工具、IP浓缩试剂、洗涤试剂、洗脱试剂、化学发光试剂。

 

8.试剂盒对内源性PTM研究灵敏度进行了优化,这对于解释PTM的生理作用至关重要。

 

Signal-Seeker™试剂盒应用实例:

 

Signal-Seeker™试剂盒研究Rac1蛋白的单泛素化多元泛素化

 

Signal-Seeker™试剂盒研究Rac1蛋白的单泛素化和多元泛素化 用MG-132预处理Swiss 3T3 细胞,然后添加/不添加CNF1 (CN04)处理3h,用BK161 kit来进行 IP,裂解液上样量300 μg /次。
Lane 1: 3 μg 未处理的裂解液;
Lane 2: Ubiquitin亲和磁珠(UBA01) +未处理的裂解液;
Lane 3: UBA01 + CN04处理的裂解液;
Lane 4: Ubiquitin 对照磁珠(CUB02) +未处理的裂解液;
Lane 5: CUB02 + CN04处理的裂解液.

 

Signal-Seeker™ kit研究PD-L1蛋白的PTM串联干扰(cross-talk

 

Signal-Seeker™ kit研究PD-L1蛋白的PTM串联干扰
Signal-Seeker™ kit研究PD-L1蛋白的PTM串联干扰

 

EGF处理1h后的细胞能明显的检测出PD-L1蛋白同时发生了泛素化(Ub)、酪氨酸磷酸化(pY)、乙酰化(Ac)

 

PTM串扰:PTM可能在蛋白质功能的调节方面协同作用, 这一过程被称为 PTM串扰,PTM串扰被认为是一种重要的细胞调节机制,对p53、tau和tubulin等模式蛋白的广泛研究证实了PTM协同作用是调节这些蛋白功能的前提。

 

艾美捷科技为您提供Cytoskeleton公司研发的用于各种转录后修饰相关的试剂盒、抗体、及亲和磁珠:

 

SUMOylation 1 相关产品:

 

产品名称 规格 货号
Signal-Seeker™ SUMO1 Detection Kit 30 assays BK165
Signal-Seeker™ SUMO1 Detection Kit 10 assays BK165-S
SUMO1 Affinity Beads 30 assays ASM11-beads
SUMO1 Control Beads 10 assays CIG03-beads

 

SUMOylation 2/3 相关产品:

 

产品名称 规格 货号
Signal-Seeker™ SUMO 2/3 Detection Kit 30 assays BK162
Signal-Seeker™ SUMO 2/3 Detection Kit 10 assays BK162-S
SUMO 2/3 Affinity Beads 20 assays ASM24-beads
Mouse IgG Control 10 assays CIG01-beads
SUMO 2/3 Mouse Antibody (12F3) 2x100 ml ASM23
SUMO 2/3 Mouse Antibody (11G2) 2x200 ml ASM24
SUMO 2/3 Mouse Antibody-HRP labeled 1x100 ml ASM23-HRP

 

磷酸化相关产品:

 

产品名称 规格 货号
Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit 30 assays BK160
Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit 10 assays BK160-S
Phosphotyrosine Affinity Beads 40 assays APY03-beads
Mouse IgG Control 10 assays CIG01-beads
Phosphotyrosine Mouse Antibody (11G2) 2x100 ml APY03
Phosphotyrosine Antibody-HRP labeled 1x100 ml APY03-HRP

 

赖氨酸乙酰化相关产品:

 

产品名称 规格 货号
Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit 30 assays BK163
Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit 10 assays BK163-S
Acetyl-Lysine Affinity Beads 40 assays AAC04-beads
Acetyl-Lysine Control Beads 10 assays CIG02-beads
Acetyl-Lysine Mouse Antibody (3C6.08.20) 1x200 ml AAC01
Acetyl-Lysine Mouse Antibody (7B5A1) 2x100 ml AAC02
Acetyl-Lysine Mouse Antibody (19C4B2.1) 2x100 ml AAC03
Acetyl-Lysine Mouse Antibody-HRP labeled 1x100 ml AAC03-HRP

 

泛素化相关产品:

 

产品名称 规格 货号
Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit 30 assays BK161
Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit 10 assays BK161-S
Ubiquitination Affinity Beads 40 assays UBA01-beads
Ubiquitination Control beads 10 assays CUB02-beads
Ubiquitin Mouse Antibody 2x100 ml AUB01
Ubiquitin Mouse Antibody-HRP labeled 1x100 ml AUB01-HRP

 

已发表精彩文章赏析:

 

  1. Barysch S. et al. 2014. Identification and analysis of endogenous SUMO1 and SUMO2/3 targets in mammalian cells and tissues using monoclonal antibodies. Nat Protoc. 9(4):896-909

 

  1. Becker J. et al. 2013. Detecting endogenous SUMO targets in mammalian cells and tissues. Nature Struc. & Mol. Biol. 20, 525-531.

 

  1. Pop, M. et al. 2004. Isotype-specific degradation of Rac activated by the cytotoxic necrotizing factor 1.J. Biol.Chem. 279: 35840-35848

 

  1. LaBarge et al. 2015. p300 is not required for metabolic adaptation to endurance exercise trainingThe FASEB Journal article doi: 10.1096/fj.15-281741.

 

Cytoskeleton公司成立于1993年,专注于生物化学和细胞过程研究中的纯化蛋白和便捷试剂盒开发与生产。公司提供药物筛选、信号转导、蛋白质翻译后修饰(PTM)、细胞骨架研究相关的系列试剂盒和产品,尤其以细胞骨架相关研究见长,既能满足于样品较少的科学研究,也可以用于小规模筛选研究和高通量大规模筛选研究。目前主要的产品有340余种,其产品主要覆盖肌动蛋白,微管蛋白,马达蛋白,小G蛋白,细胞外基质,活细胞成像等相关领域,提供对应的蛋白质,抗体,检测与分析试剂盒,并且产品线还在不断的扩大中。此外,公司还提供微管蛋白,肌动蛋白,小G蛋白,GAPs,GEFs等现有产品的药物筛选服务。

 

艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:Abbkine、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Alomone Labs、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、PhytoAB、Norgen Biotek、iRegene、StressMarq、Trevigen、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological等,可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。

 

作为Cytoskeleton在中国的区域总代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供最全面的Cytoskeleton产品以及订制服务。

 

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