上期文章“换个姿势了解蛋白质Marker!”以简单易懂的图片形式向童鞋们介绍了什么是蛋白marker。了解到在Western Blot过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的功能。今天具体介绍蛋白marker的作用并附文末有惊喜!
Marker是表面覆盖有特殊反光材料的标记物,常见形状有球形、半球形。染色体上一个可以被识别的区域(比如限制性内切酶的酶切点,基因的位置等)。标记的遗传能够被检测出来。标记可以是染色体上有表达功能的部分(比如基因),也可以是没有编码蛋白质功能但遗传特性能够被检测出来的部分。其次,蛋白marker可分为未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准以及预染的Marker即单色预染和多色预染。
预染蛋白分子量标准
预染蛋白分子量是一些纯化好的蛋白混合物,通过与染料共价耦联,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了我们的实验,这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后,以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价耦联,所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化,可能导致一些偏差,所以不太适合精确定位蛋白——不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样,我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小,zui后都需要Western来定性,所以如果不是要区分大小相近的条带,预染Marker还是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。
蛋白分子量标准可以分成未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准二个级别。蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用,所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。
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