蛋白质纯化的指导原则

在这里所示的蛋白质纯化指导原则可以被用于任何纯化过程,并且可以作为如何系统化处理样品的建议,用来研制任何有效的纯化策略。

 

蛋白纯化设备

 

1、明确目标

对于纯化样品,明确最终产品需要达到的纯度、活性和产量要求,要避免过度纯化或者使用的纯化不够,达不到要求的纯度。

 

2、明确需要纯化的目标蛋白质的特性和关键的杂质

对纯化技术的选择要简单化,并且要产生最佳的纯化效果。

 

3、发展检测分析技术

能够快速的检测蛋白质的活性/回收率和关键的污染物。

 

4、使每一阶段处理的样品最小化

避免过多的处理步骤,过多的处理步骤有可能会损失样品活性/降低回收率。

 

5、尽可能少地使用添加剂

可能需要额外的纯化步骤去除添加剂,否则添加剂可能会干扰样品的活性分析。

 

6、尽早去除对样品有损伤的杂质

例如,蛋白酶

 

7、在每一步纯化过程中使用不同的纯化技术

充分利用样品的特性对样品进行分离纯化(样品大小、电荷、疏水性、配基的特异性)

 

8、使用的纯化步骤尽可能少

额外的纯化步骤将会减少目标蛋白的产量和增加纯化时间,要合乎逻辑的组合纯化步骤。

 

保持简单化!!

 

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