高效蛋白分离定量工具,实验快人一步

 

前情回顾:研究蛋白翻译后修饰(PTM),这个试剂盒真好用

 

前面给大家介绍了高大上的Signal-Seeker试剂盒,下面我们来仔细瞧瞧试剂盒中用于蛋白提取和定量的黑科技吧!

 

通常我们会使用变性裂解缓冲液从各种细胞组分中分离蛋白质;然而,变性缓冲液与非变性裂解缓冲液相比有明显的缺点:如与标准比色蛋白测定不相容、基因组DNA污染导致的粘度过大以及对下游免疫沉淀分析的负面影响

 

在这里,我们将介绍Cytoskeleton公司新开发的BlastR™ Rapid Lysate Prep试剂盒,该试剂盒含有一种变性缓冲液—BlastR™裂解缓冲液,可以从所有的细胞组分中分离蛋白质,从而得到与其他变性缓冲液(如Laemmli)类似的蛋白质图谱。与常用的变性缓冲液不同,BlastR™缓冲液可与传统的蛋白质分析方法兼容,便于定量。此外,该试剂盒中包含的BlastR™过滤器能够比超声处理或针剪处理更快速、更温和、更有效地去除基因组DNA污染。该系统与翻译后修饰(PTM)的免疫沉淀试剂相容。BlastR™快速裂解试剂盒可用于各种细胞或组织,获得用于Western和免疫沉淀检测的裂解液

 

首先我们通过一个小视频来了解一下用BlastR™ Rapid 试剂盒进行蛋白提取和定量的操作流程吧

 

 

上述操作主要分三步走:细胞或者组织裂解、基因组DNA过滤蛋白定量,下面我们从这三个部分介绍该试剂盒的特点:

 

用数据说话:

 

一、细胞或者组织裂解

 

1.BlastR™裂解缓冲液可用于提取各种细胞组分里的蛋白

BlastR™裂解缓冲液可用于提取各种细胞组分里的蛋白

 

分别用BlastR、RIPA、mPER、IP LysisDenaturing(1% SDS)、Laemmli裂解A431细胞。

同时分别从胞膜、细胞质、线粒体和核标记物中分离一些蛋白,我们发现:

 

BlastR可以轻松从各个细胞组分中分离蛋白

 

2.BlastR™裂解缓冲液与传统蛋白定量(比色法)完美兼容

 

BlastR™裂解缓冲液与传统蛋白定量(比色法)完美兼容

 

A:分别用上述6种缓冲液裂解细胞

 

B:传统比色法定量,BlastR和RIPA与OD值线性拟合程度非常好

 

3.BlastR™裂解缓冲液完美兼容免疫沉淀(IP)实验

 

大部分变性缓冲液后续无法进行IP实验主要是由于缓冲液会破坏磁珠里的抗体或蛋白结合域,BlastR按说明书建议浓度,不会对磁珠产生干扰。

 

BlastR™裂解缓冲液完美兼容免疫沉淀(IP)实验

 

BlastR™裂解缓冲液提取蛋白进行IP实验用于研究各种翻译后修饰(SUMO2/3、乙酰赖氨酸化、泛素化、磷酸化)

 

4.BlastR™裂解缓冲液可从各种组织中提取蛋白

 

BlastR™裂解缓冲液可从各种组织中提取蛋白

 

BlastR可轻松从肝、脑、心脏等各种组织中分离出蛋白

 

BlastR缓冲液与其他常规缓冲液优势对比汇总:

 

缓冲液名称 细胞质 细胞核 细胞膜 线粒体 标准蛋白检测 IP兼容
BlastR Yes +++ +++ +++ Yes Yes
RIPA Yes + ++ +++ Yes Yes
Company T Yes - + + Yes Yes
Company P Yes + + +++ Yes Yes
Denaturing Yes +++ +++ +++ No 有时
1×Laemmli Yes +++ +++ +++ No No

注:Company T代表mPER (Thermofisher, MA)

Company P:代表IP Lysis (Pierce, )

 

二、基因组DNA过滤

基因组DNA过滤 过滤装置及步骤:
1.加入裂解液
2.注射器过滤DNA
3.收集蛋白样品
BlastR Lysis Filter是高效的基因组DNA过滤装置
轻松解决基因组DNA污染BlastR Lysis Filter
A:分别经过BlastR Filter、注射器针头或超声处理5、10、20、30秒后的DNA条带BlastR Filter处理后无条带
B:未过滤和用BlastR Filter过滤经SDS-PAGE分离的蛋白条带
C:B图的样品,转至PVDE,用EGFR抗体检测的EGFR蛋白条带
不同分子量条带很清晰,无拖带现象

 

三、蛋白定量 

 

Cytoskeleton提供了两种标准的蛋白质定量检测方法:

 

  1. Advanced Protein Assay™能够检测浓度非常低的蛋白(低至1μg/ml)
  2. Precision Red™可用于测定不同缓冲液中的的蛋白质。

 

Precision Red™

Precision Red™分别测定Actin、BSA、IgG和Tubulin的标准曲线,线性拟合程度非常好

 

看到如此优秀又方便的蛋白分离与定量工具,你有心动吗?作为生命科学的专业解决方案供应商,艾美捷科技为您提供Cytoskeleton公司研发蛋白分离与定量工具:

 

 

Cytoskeleton公司成立于1993年,专注于生物化学和细胞过程研究中的纯化蛋白和便捷试剂盒开发与生产。公司提供药物筛选、信号转导、蛋白质翻译后修饰(PTM)、细胞骨架研究相关的系列试剂盒和产品,尤其以细胞骨架相关研究见长,既能满足于样品较少的科学研究,也可以用于小规模筛选研究和高通量大规模筛选研究。目前主要的产品有340余种,其产品主要覆盖肌动蛋白,微管蛋白,马达蛋白,小G蛋白,细胞外基质,活细胞成像等相关领域,提供对应的蛋白质,抗体,检测与分析试剂盒,并且产品线还在不断的扩大中。此外,公司还提供微管蛋白,肌动蛋白,小G蛋白,GAPs,GEFs等现有产品的药物筛选服务。

 

艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:Abbkine、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Alomone Labs、Biovision、Biosensis、开曼生物、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、PhytoAB、Norgen Biotek、iRegene、StressMarq、Trevigen、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological等,可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。

 

作为Cytoskeleton在中国的区域总代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供最全面的Cytoskeleton产品以及订制服务。

 

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