核酸定量哪家强?荧光探针VS分光光度法

 

DNA编码所有的遗传信息,是创造所有生物生命的蓝图。它充当允许遗传物质在世代之间传递的存储设备。而RNA充当读取DNA中存储信息的读卡器。DNA中存储的遗传信息由RNA携带,同时RNA充当核糖体的信使,并在核糖体中合成蛋白质。分子生物学这整个过程称为“中心法则”。

 

DNA编码

 

基于核酸的检测的范围继续扩大,关于选择核酸检测方法有很多。

 

目前常用的是分光光度法,分光光度法利用了核酸的紫外吸收特性。核酸,包括DNA和RNA,均由脱氧核糖或核糖、磷酸基及含氮碱基构成。其中,由于碱基含有芳香环结构,因此具有紫外吸收的特性。通过测定260nm处的吸光度,对DNA和RNA进行定量。与此同时,还能通过计算OD260/OD280估计核酸的纯度。由于此法不具有选择性,无法区分DNA、RNA或蛋白质。检测数值极易受到其他污染物(如游离核苷酸、盐和有机化合物)和碱基组成差异的影响。

 

今天给大家介绍荧光染料法,AAT开发的多款荧光染料可以特异地与双链DNA、单链DNA、RNA相结合,并在特定波长光源的激发下,发出荧光,这一系统不会检测到样本中可能存在的其他杂质分子,荧光强度与样品中的靶分子浓度相对应。

 

DNA和RNA定量试剂

 

Helixyte Green dsDNA定量试剂(17597)和StrandBrite Green RNA定量试剂(17611)分别对双链DNA和单链RNA进行了优化。它们对核酸有很高的亲和力,对结合核酸有极大的荧光增强作用,使得在几分钟内直接检测复杂溶液中微量核酸成为可能,而且一般不会受到其他生物分子的干扰。

DNA和RNA定量试剂

图1.小牛胸腺DNA中使用Helixyte 绿色和PicoGreen进行DNA定量。由图看出Helixyte 绿色和PicoGreen  具有几乎相同的性能。

 

Helixyte Green是一种出色的核酸定量试剂,与dsDNA结合后可显著增强荧光。它具有与PicoGreen®相同的光谱特性,因此是PicoGreen®的绝佳替代品(PicoGreen®是Invitrogen的商标)。它是可用于定量溶液中DNA的最敏感的染色剂之一。使用Helixyte Green,您可以在ssDNA,RNA和游离核苷酸存在的情况下选择性地检测低至25 pg / ml的dsDNA。该测定法在三个数量级上是线性的,并且几乎没有序列依赖性,使您能够准确地测量来自多种来源的DNA,包括基因组DNA,病毒DNA,微量制备DNA或PCR扩增产物。

 

在进行Northern杂交分析、S1核酸酶分析、RNase保护分析、cDNA文库制备、反转录PCR之前,检测和定量少量RNA对于多种分子生物学过程非常重要,例如测量体外转录RNA的产量和测量RNA浓度。测量核酸浓度最常用的技术是在260nm处测定吸光度,吸光度法的主要缺点是蛋白质、游离核苷酸和其他紫外线吸收化合物的干扰,但使用敏感的荧光核酸试剂可以缓解这种干扰问题。StrandBrite RNA定量试剂是一种用于溶液中RNA定量的超灵敏荧光核酸染料。StrandBrite RNA定量试剂可以用荧光酶标仪或荧光分析仪检测到低至5ng/mL的RNA。

 

Helixyte Green dsDNA和StrandBrite Green RNA探针的优势:

 

  • 高灵敏度:Helixyte Green和StrandBrite Green的灵敏度比UV吸收率测定法高10,000倍
  • 选择性高:与紫外吸收的测量不同,这些检测不受蛋白质,游离核苷酸或非常短的寡核苷酸的影响,从而使完整的寡核苷酸和核酸的定量在复杂混合物(例如血清或全血)中更加准确。
  • 操作简单:这些检测方法非常简单,不需要分离步骤,因此非常适合自动化,高通量筛选
  • 检范围广:对于Helixyte Green的检测,定量在四个数量级内都是准确的。基于StrandBrite 的荧光检测在三个数量级上都是准确的。

 

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17656 StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒 100 tests
17657 StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒 高选择性 100 tests

 

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