表观遗传之RNA甲基化一 5mc甲基化

 

Hello大家好,我今天又给大家带来表观遗传的第四集:RNA甲基化一 5mc甲基化,不知道大家有没有期待呢?

 

通过观看前面的剧情,我们了解到DNA 5mC甲基化。DNA中的5-甲基胞嘧啶(5-mC)是通过DNA甲基转移酶在胞嘧啶环的5个碳原子上共价加成甲基而产生的。这个过程已经被充分研究,并且通常与基因表达的抑制有关。还观察到在人类中,5-mC存在于各种RNA分子中,包括tRNA,rRNA,mRNA和非编码RNA(ncRNA)。 在mRNA和ncRNA中至少发现了10,275个5-mC候选位点,覆盖了转录组中总胞嘧啶残基的10.6%,这个比率,确实值得被关注和研究呢。

 

5-甲基胞嘧啶(5-mC)

5-mC似乎在某些类别的ncRNA中富集,但在mRNA中相对较少。 但是,大多数(83%)候选位点都存在于mRNA中。 在这些转录物中,5-mC似乎在蛋白质编码序列中被耗尽,但富含5'和3'UTR。 已知两种不同的甲基转移酶NSUN2和Dnmt2可以催化真核RNA中的5-mC修饰。 最近的数据强烈表明,RNA胞嘧啶甲基化会影响各种生物学过程的调控,例如RNA稳定性和mRNA翻译。 此外,vtRNA中5-mC的丢失会导致异常加工成与Argonaute相关的小RNA片段,这些片段可以充当microRNA。 因此,vt ncRNA的加工受损可能会导致与NSun2缺陷相关的人类疾病。

 

今天就给大家安利一波针对RNA 5mC的产品。

 

1.P-9009,MethylFlash 5-mC RNA Methylation ELISA Easy Kit (Fluorometric),ELISA样形式基于荧光的总5-mC RNA甲基化定量。

 

该产品具有以下优势和特点:

【1】快速:整个过程仅需2个小时40分钟

【2】稳定:试剂盒的组成使测定具有较大的“信号窗口”,重复之间的差异较小。

【3】方便:固有的低背景信号,从而消除了板块步骤的需要

【4】灵敏-检测限可低至200 ng输入RNA中的5-mC RNA的0.02%。

【5】特异性-对5-mC的特异性高,在指定的样品RNA浓度范围内与未甲基化的胞嘧啶或羟甲基化的胞嘧啶没有交叉反应。

【6】通用–阳性和阴性对照均可检测任何物种中的5-mC RNA甲基化

【7】准确-可按百分比比例分级的优化阳性对照,使测定更加准确并与HPLC-MS分析具有高度可比性

【8】灵活-带孔微孔板格式使该测定可用于手动或高通量分析

 

简单的操作步骤~~

RNA 5mC操作步骤

检测效果~~

RNA 5mC检测效果

图p-9009:使用MethylFlash™5-mC RNA甲基化ELISA简易试剂盒(荧光法)准确定量不同物种的各种RNA样品中5-mC含量。 结果与通过MS-LC获得的结果密切相关。

 

参考文献:

【1】Park MH et. al. (January 2020). Mono-(2-Ethylhexyl)phthalate Regulates Cholesterol Efflux via MicroRNAs Regulated m<sup>6</sup>A RNA Methylation.Chem Res Toxicol.

【2】P-9007 piNext 5-mC RNA Bisulfite-Seq Easy Kit (Illumina),用于RNA亚硫酸氢盐转化,然后进行“后亚硫酸氢盐”文库制备过程。

 

该产品具有以下优势和特点:

 

【1】高灵敏度和高效率:通过使用一种创新方法,通过随机探测可以完整地标记亚硫酸氢盐转化的RNA的衔接子标签,并阻止形成未标记或半标记的RNA片段,包括非条形码(单重)和条形码(多重) 文库,可以高灵敏度和高效率可靠地制备文库,从而为构建5mC RNA-seq文库提供了可靠而可靠的方法。 优化的亚硫酸氢盐RNA方法和增强的衔接子标签消除了片段丢失和选择偏倚,使输入RNA可以低至5 ng,并提高了完全标记的cDNA文库的效率。

 

【2】简单且简化的过程:整个过程可以在6个小时内完成。 无胶大小选择/纯化可节省时间并防止处理错误以及有价值的样品丢失。

完全转化:创新的试剂组合物可将未甲基化的胞嘧啶以大于99.9%的水平转化为尿嘧啶,当使用指定范围的样品RNA时,甲基胞嘧啶向胸腺嘧啶(<0.1%)的转化不存在或可忽略不计。

 

【3】 极为方便:该试剂盒包含RNA库制备过程中每个步骤的所有必需组件,足以进行亚硫酸氢盐的转化,连接,纯化,大小选择和库扩增,从而简化了亚硫酸氢盐RNA库的制备过程,以获得最可靠和一致的结果

 

【4】最小的偏差:超高保真HiFi扩增可实现亚硫酸氢盐转化的RNA文库的可再生高产量,同时序列偏倚最小且错误率低。

 

【5】 广泛的样品适用性:起始材料可以是从各种组织/细胞样品(例如新鲜和冷冻的组织),培养瓶或微孔板中培养的细胞中分离的总RNA。

 

5-mC RNA样品适用性

图p-9007:文库片段的大小分布:使用EpiNext™5-mC RNA Bisulfite-Seq Easy Kit(Illumina)从50 ng小鼠RNA中制备亚硫酸氢盐后cDNA文库。

 

3.p-9003 Methylamp RNA Bisulfite Conversion Kit,用于稳健的、基于化学的亚硫酸氢盐处理RNA甲基化胞嘧啶分析。

 

该产品具有以下优势和特点:

【1】快速便捷的操作步骤,可在3小时内完成。

【2】当使用指定范围的输入样品RNA时,完全或完全地将未甲基化的RNA胞嘧啶转化为尿嘧啶(> 99.9%),而甲基胞嘧啶向胸腺嘧啶(<0.1%)的不正确/错误转化或可忽略不计。

【3】强大的RNA降解保护,可防止90%以上的RNA丢失。

【4】随附的对照引物对亚硫酸氢盐转化的RNA具有特异性,可用于测试亚硫酸氢盐转化是否已正确实现。

【5】少量输入RNA可用于亚硫酸氢盐转化,每个反应低至5 ng。

【6】简单,可靠且一致的反应条件。

 

RNA亚硫酸氢盐测序分析

图p-9003:RNA亚硫酸氢盐测序分析:使用对亚硫酸氢盐转化的RNA特异的28S rRNA引物,对从MCF-7细胞分离的RNA进行亚硫酸氢盐处理,cDNA合成和PCR扩增后测序。 未甲基化的胞嘧啶(#4、5、14)被转化为尿嘧啶并被检测为胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶(#8)保持不变。

 

下期预告:组蛋白修饰—组蛋白乙酰化,大家敬请期待噢~~

看到这儿,您心动了吗?马上联系小艾吧!

或者扫描下方二维码,即可联系您的专属客服哦~

 

 

作为一家具有高端的技术实力、先进的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业,总部位于武汉光谷高新技术开发区,服务面向全国。艾美捷科技是集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品、整合的解决方案,及优质的物流服务。为了更好的服务客户,公司组建了一支经验丰富的研发团队-艾美捷生物技术中心,进入研发生产阶段,将更优质的产品推荐给国内生物领域的同仁们!

 

艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商优保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在短时间内为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品及物流服务。

 

每日生物评论
特色荧光检测服务促销

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen: