双链RNA（dsRNA）是通过体外转录产生的治疗性mRNA的主要杂质。需要在mRNA生产批次中严格监测该转录副产物的杂质水平，以确保有效的mRNA表达并降低不期望的高免疫原性风险。
使用SCICONS使用平行运行的dsRNA对照，可估计dsRNA杂质的量
图1：使用SCICONS
A）将等量（1 μg）的Poly（A）ssRNA（阴性对照）和dsRNA 142 bp（阳性对照）沿着与dsRNA 142 bpbp的4倍稀释系列一起进行印迹，随后用SCICONS
B）使用SCICONS通过变性琼脂糖凝胶电泳确认mRNA完整性。
ARCA：抗反向帽类似物，MT：甲基转移酶，AnP：南极磷酸酶，NTA：假尿苷，Me 1 NTA：N1-甲基假尿苷，5 moU：5-甲氧基尿苷，5 meC：5-甲基胞苷。
双链（ds）RNA形成是病毒感染的标志，其对于诱导先天免疫是必不可少的。dsRNA也参与基因沉默，并在基于体外转录的RNA合成期间作为副产物产生。抗dsRNA单克隆抗体是检测细胞培养组织（如FFPE样品）以及体外转录（m）RNA制备物中dsRNA的有效工具。
- 用于表征检测具有dsRNA基因组或中间体的病毒（包括SARS、丙型肝炎、登革热或西尼罗河病毒）。
- 作为确定未知病原体是病毒还是细菌来源的诊断工具。
- 用于体外转录（m）RNA制备的质量控制。
可用dsRNA检测产品概述
| 产品 | 描述 | 选择指南 |
|---|---|---|
| 抗dsRNA单克隆抗体J2 | 小鼠，IgG2a，κ轻链 | dsRNA检测的金标准 推荐用于体外转录（m）RNA的质量控制 |
| 抗dsRNA单克隆抗体J5 | 小鼠，IgG2b，κ轻链 | 具有相似亲和力和特异性的J2的同位素替代物。 推荐用于在免疫荧光显微镜中同时检测dsRNA和其他标记物 |
| 抗dsRNA单克隆抗体K1 | 小鼠，IgG2a，κ轻链 | 推荐用于Poly I：C检测 J2交叉反应情况下的替代品 |
| 抗dsRNA比较集 | J2、J5和K1抗体大小的样本 | 推荐用于J2、J5和K1抗体的比较试验 |
| 抗dsRNA单克隆抗体K2 | 小鼠，IgM，κ轻链 | J2 K1的替代同种型& 推荐用于（夹心-）ELISA |
| dsRNA 142 bp | 合成dsRNA | 抗dsRNA单克隆抗体J2、K1和K2的阳性对照 |
References:
[1] Kariko et al. (2005) Suppression of RNA Recognition by Toll-like Receptors: The Impact of Nucleoside Modification and the Evolutionary Origin of RNA. Immunity 23 (2):165.
[2] Kariko et al. (2008) Incorporation of Pseudouridine yields superior nonimmunogenic vector with increased translational capacity and biological stability. Molecular Therapy 16 (11):1833.
[3] Baiersdörfer et al. (2019) A Facile Method for the Removal of dsRNA Contaminant form In Vitro-Transcribed mRNA. Mol Ther Nucleic Acids 15:26.
[4] Moradian et al. (2022) Chemical modification of uridine modulatesmRNA-mediated profinflammatory and antiviral response in primary human macrophages. Mol Ther Nucleic Acids 27:854.
[5] Piao et al. (2022) Double-stranded RNA reduction by chaotropic agents during in vitro transcription of messenger RNA. Mol Ther Nucleic Acids 26:618.
[6] Schönborn et al. (1991) Monoclonal antibodies to double-stranded RNA as probes of RNA structure in crude nucleic acid extracts. Nucleic Acids Res. 19:2993.
