Mabtech肽库帮您一键解决ELISpot阳性对照的设置问题

 

当前新冠病毒引发的肺炎疫情正肆掠全球,中国作为受疫情影响最大的国家,第一时间启动了疫苗研发工作,在科研人员的努力下,灭活疫苗、mRNA疫苗、重组蛋白疫苗、病毒载体疫苗、DNA疫苗等多条技术路线并行推进,加速疫苗研发。当前部分疫苗品种已经进入到动物试验阶段。ELISpot检测作为评价疫苗细胞免疫反应最有效的指标,其在疫苗研发中的作用不容小觑。

 

之前我们已经详细的介绍过Elisplot的原理、优势及品牌介绍问题,今天我们就带大家来看看Elisplot阳性对照的设置问题:

 

Elisplot阳性对照设置

 

A.特异性单抗包被在培养孔底部;B.加入细胞及刺激物培养,阳性细胞开始分泌细胞因子,细胞因子就近被包被抗体捕获;C.移出细胞,板底留下细胞因子的潜在“影像”;D.加入酶标记的检测抗体,检测抗体和“影像”上的细胞因子结合,形成双抗体夹心;E.加入显色底物,在酶的作用下,生成不可溶的色素,就近沉淀在局部的膜上形成斑点;F.斑点计数,数据处理,结果分析。

 

一般情况下,为了使实验结果更具说服力,大部分实验都需要设置对照组,通过对照组与实验组的比对分析,以排除无关变量的影响,Elisplot检测也一样,通常一次严谨的ELISpot实验通常需要设置以下三种对照:

 

阳性对照——细胞经特异性抗原或多克隆抗体刺激  用来确定试剂盒正常工作,细胞功能完整;排除假阴性结果

阴性对照——细胞不经刺激  用来确定自发分泌因子的细胞个数;排除假阳性结果

背景对照——不加细胞和其他所有试剂  用来排除试剂或其他介质的影响产生的斑点;排除假阳性结果

 

针对阳性对照,阳性刺激物通常包括两大类:非特异性刺激物和特异性刺激物

 

特异性刺激物

 

如上图所示,非特异性的刺激物可以激活几乎所有的淋巴细胞,使之分泌各种细胞因子,种类通常是有丝分裂原,比如植物凝血素(PHA),伴刀豆蛋白A(ConA),离子酶素/佛波酯(Ionomycin/PMA),细菌脂多糖(LPS),美洲商陆PWM等。而特异性刺激物通常包括三类:T细胞表位肽、重叠多肽库和蛋白质。其中,T细胞表位肽是较好的特异性刺激物。这些多肽不需要抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)的内化和加工,可以直接被呈递给T细胞。由于每一条T细胞表位肽都有相对应的MHC II分子,代表了一种特异性的细胞免疫,因此不确定因素少,实验结果非常明确。常见的这类阳性刺激物有CEF肽库、CMV肽库等。Mabtech开发的肽库可以作为T细胞的抗原特异性阳性对照,且所有肽库都经过验证,都可用于ELISpot、FluoroSpot和FC。

 

  • CEF肽库:可特异性刺激人的CD8 T细胞 刺激CD8 + T细胞优先产生IFN-γ;CEF肽库由分别来自人CMV、EBV和流感病毒的23个MHC I型限制性病毒肽组成。
  • CEF extended(CEF扩展)肽库:可特异性刺激人的CD8 T细胞 刺激CD8+ T细胞产生IFN-γ、IL-2和Granzyme B;CEF扩展肽库由分别来自人CMV、EBV和流感病毒的32个MHC I型限制性病毒肽组成。
  • CEFTA肽库:可特异性刺激人的CD4 T细胞 刺激人CD4 + T细胞产生IFN-γ、IL-2、IL-5和IL-13;CEFTA肽库由分别来自人CMV、EBV、流感病毒、破伤风毒素和腺病毒5的35个MHC II型限制性病毒肽组成。
  • CMV肽库:可特异性刺激CD4和CD8 T细胞 刺激CD4+和CD8+ T细胞产生IFN-γ、、IL-2、IL-5和IL-13;CMV肽库包含42个巨细胞病毒多肽。肽库中的抗原为pp50、pp65、IE1、IE2和包膜糖蛋白b。28个肽段为MHC I型限制性肽段,14个为MHC II型限制性肽段。

 

货号 名称 规格
3616-1 CEF peptide pool for human CD8 T cells 23x25µg
3618-1 CEF extended peptide pool for human CD8 T cells 32x25µg
3617-1 CEFTA peptide pool for human CD4 T cells 35x25µg
3619-1 CMV peptide pool for human CD4 and CD8 T cells 42x25µg

 

特别关注:Mabtech ELISAPRO kit新推出1块板包装

 

Mabtech ELISAPRO kit

 

为了满足广大用户的需求,Mabtech新推出1块预包被板包装ELISA试剂盒。新包装(1块板包装),新设计(更新的实验步骤)和新数据(额外验证的数据)。由于Mabtech原有的产品系统存在了很长时间,因此厂家对一些产品的标准曲线又进行了重新验证和更新。虽然包装是新的,但是试剂盒中所有的组分,例如单克隆抗体,预包被板,标准品和缓冲液和之前是完全一样的。目前Mabtech ELISAPRO kits可以提供1块(1块板包装指标清单),2块和10块板的包装。

 

ELISAPRO kits组分包括:

96孔可拆预包被板

生物素化检测单克隆抗体

ELISA标准品

Streptavidin-HRP

TMB底物

ELISA稀释液,检测缓冲液或Apo ELISA浓缩缓冲液(防止血清或血浆中嗜异性抗体的干扰)

缓冲液,稀释液,终止液,封板膜

 

 

Mabtech公司于1986年创办于瑞典,是一家欧洲的集研究,开发,销售,技术支持为一体的高科技免疫生物技术公司。Mabtech公司始终专业致力于研发新的单克隆抗体,生产创新的免疫试剂和销售高品质的全配套的免疫试剂盒。公司核心业务是致力于优化发展酶联免疫斑点法技术 (ELISpot)、荧光免疫斑点法技术 (FluoroSpot) 和酶联免疫吸附试验技术 (ELISA) 等免疫学方法。公司开发和生产多种针对细胞因子,免疫球蛋白和载脂蛋白的单克隆抗体,用于生命科学研究中的体外应用。Mabtech的试剂盒可用于研究感染性疾病,癌症,过敏,移植等免疫反应,通常用作疫苗试验中的监测工具。此外,还生产用于兽医和心血管研究的试剂盒。

 

作为Mabtech在中国的区域总代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供最全面的Mabtech产品以及订制服务。

 

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