WB干货|IPKine™二抗–完美避免IP-WB实验重链或轻链干扰!

 

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。

 

原理:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在Argarose Beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白,那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对B蛋白进行检测,进而证明两者间的相互作用。

 

这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

 

免疫共沉淀原理

(图片来源于网络)

 

常见问题:在免疫沉淀实验后的WB验证环节中,当使用常规的 Anti-IgG (H+L) 酶标二抗时,通常会出现对应免疫沉淀一抗的重链(50 kDa)和轻链(25 kDa)的两条带。如果检测的目的蛋白分子量在50 kDa或者25 kDa附近时,就会受到这两条带的干扰。

 

一般解决办法:选择不同种属来源的一抗分别进行IP和WB实验,然后再选择无种属交叉反应的二抗进行WB实验;这种方案相对来说比较昂贵,需要买两个一抗和两个对应的二抗。

 

Abbkine解决方案:产生此问题的重点在于实验中目的蛋白的信号模糊,无法进行判断,那就需要在根本上将干扰的信号降到最低,而IPKine系列二抗经过特别设计和优化,可以和重/轻链特异性结合从而明显看到目的蛋白信号。如果目的条带在55kDa左右,可以通过选择与轻链特异性结合的二抗,来消除重链条带对目的蛋白检测的干扰。如下图:

 

IPKine系列二抗

 

IPKine是一系列新型的二抗产品,能有效解决IP-WB后的轻/重链干扰问题。IPKine系列二抗经过特别优化,不会与IgG的轻/重链分子结合,只识别IgG分子的重/轻链部分,从而能有效解决IP实验后的WB检测中面临的轻/重链干扰信号降到最低。

 

另外,IPKine系列二抗经过特别优化,其针对目的种属的特异性非常高,同时针对其他非目的种属的抗体分子的非特异性结合降到最低,从而有效避免了二抗与样本内免疫球蛋白分子的非特异性杂交,提高实验的特异性和信噪比。

 

本产品使用简单,只需将IPKine系列二抗替代传统的二抗使用即可。无需添加其他额外步骤或者试剂。最终让您得到最干净、最清晰的目的条带。

 

IPKine系列二抗

 

IPKine Mouse Anti-Rabbit IgG LCS 轻链特异性二抗检测NUP50蛋白的IP结果,完美解决重链干扰问题!

 

Abbkine 相关产品信息:

产品名称 特异性 货号 规格
IPKine™ HRP Goat Anti-Mouse IgG LCS Light chain specific
(轻链特异性)
A25012 100/500 ul
IPKine™ HRP Mouse Anti-Rabbit IgG LCS A25022 100/500 ul
IPKine™ HRP Goat Anti-Mouse IgG HCS Heavy chain specific
(重链特异性)
A25112 100/500 ul
IPKine™ HRP Goat Anti-Rabbit IgG HCS A25222 100/500 ul

 

IPKine™ 特点与优势:

1,小包装即用型试剂,极具性价比;

2,更干净的背景,更清晰的条带,卓越的信噪比;

3,完美避免抗体重链或者轻链的干扰问题;

4,使用简便,无需额外的试剂和操作步骤;

5,经特殊优化,与其它种属的IgG分子的交叉反应极低。

 

Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!

 

关于Abbkine

我们的定位:服务于细胞和蛋白研究全球用户,以应用流程和产品组合的方式为用户提供经济型和技术型的产品解决方案。

我们的使命:激发我们内在的创造力,提供有竞争力的生物医学产品和服务,持续为客户创造最大价值。

我们的愿景:成为受人尊重、世界一流的生物医学产品及服务供应商。

 

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