终点PCR中的顶配—热启动PCR

 

 

夏天,最怕听到“热”这个字!有没有人跟小编一样,一听,就热?

 

 

所幸,最近一节段还是炎夏来临前的雨季,全国范围内还是比较凉爽的,对于怕热的人生,再来一块清凉的“冰心”,才最爽!

 

 

凉爽

 

可见温度对生活的影响有多大,炎炎夏日,空调开高一度和低一度,有时候后就是天(da)差(han)地(lin)别(li).

 

对于温度异常敏感的PCR实验,更是如此!

 

每次PCR实验都要到处找冰盒,铲冰…… 各种怕温度敏感的酶在小小的PCR小管里发生不该发生的story,比如非特异扩增,悄悄地合成引物二聚体等,最后P出来各种条带,我们就要cry了。

 

那么,如果我们使用了热启动DNA聚合酶,故事就不一样了。经过化学修饰的TaqDNA聚合酶,对温度“炒鸡”稳定,PCR加样再也不需要到处找冰盒铲冰,小心翼翼的忐忑了。HoT FIREPol®热启动DNA酶常温稳定一个月,只有温度达到95℃才会被激活。所以我们再也不必担心加样的过程以及升温之前,PCR就开始反应,合成不需要的片段。做到随意PCR 如吃瓜!

 

PCR反应

 

好啦,言归正传,吃瓜的同时,我们来点专业解释:

在传统的PCR反应中,反应体系各成分(Taq DNA聚合酶、dNTP 和引物等)均是一次加入并进入循环,在反应温度由室温(25℃)上升至高温(94~95℃)过程中,可能发生引物错配和二聚体的形成。引物与模板中一些非靶位点的错配和引物之间形成的二聚体,在Taq酶的作用下均可延伸,这些非特异性产物又可以在后面的PCR循环中继续扩增,使非特异性产物不断积累,同时,也消耗反应体系的各成分,最终PCR扩增的特异性产物大大减少。热启动PCR(hot start PCR)是指DNA聚合酶只有在样品温度至少超过70℃时才发挥作用的PCR。通过这种方式控制PCR反应的必须组分DNA聚合酶,直到反应混合物被加热到可以阻止非特异引导和引物聚合的温度后,再启动PCR达到有效扩增特异性PCR产物的目的。

 

热启动PCR循环是这样的,为了充分激活酶,比普通PCR增加了热激活步骤。

循环步骤 温度 时间 循环
起始热激活 95℃ 12-15min 1
变性 95℃ 15-30s 26-35
退货 50-68℃ 30-60s
延伸 72℃ 1-4min
终末延伸 72℃ 5-10miin 1

 

PCR的灵魂—热启动DNA聚合酶

 

与TaqDNA酶不同,热启动DNA聚合酶是经过化学修饰的Taq酶,常温操作时其没有活性,只有高温才能激活酶,可以避免低温或者常温操作时非特异性扩增以及引物二聚体的产生。这款Solis 热启动 FIREPol DNA 聚合酶更灵敏,特异性更强,可以常温操作,常温稳定1个月。同时,PCR产物可以无忧做下游实验DHPLC和TA克隆。

 

热启动PCR-第一款

热启动DNA聚合酶组合套装(货号# 01-02-xxxxx)

给你最大自由度的一款PCR组合,它的组分有:

 

1.热启动DNA 聚合酶

2.反应buffer1---10x 反应液B1(不含Mg2+和去污剂)

3.反应buffer2---10x 反应液B2 (不含Mg2+)

4.25 mM MgCl2

5.10x Solution S

 

细心的同学已经发现,为什么一般的PCR体系只有一个buffer,而这个却有两个?

 

小编为你解密啦!之所以包含两款Buffer 是为广大用户考虑的,如果你的样本不需要去污剂,或者需要自由调整Mg2+浓度,这款给你最大自由度 ,可以按照您实验需求调整方案。而这款套装的最大的宝藏是组分Solution S,常规PCR不需要它,但是如果你遇到扩增困难的模板,或者高GC含量模板,10x Solution S 就要登场啦,并且你可以根据需要调整它的工作浓度,1×,2×,3×.

 

漂亮的数据告诉你它有多好!

 

数据显示HoT FIREPol®热启动DNA酶可以很好的扩增基因组DNA片段

 

扩增人基因组DNA的4个片段:1,2为HoT FIREPol®DNA聚合酶;3,4为竞品A公司;5,6为竞品B公司。

 

如果您需要热启动PCR预混液,这里有多功能热启动PCR预混液,因为篇幅有限,这里给大家列表展示:

 

 

基于热启动酶的PCR类型 英文名称 产品特色 MgCl2 浓度 *扩增片段范围 货号
高GC含量PCR HOT FIREPol®
gC Master MIX
ž 尤其适合>79%GC的DNA模板扩增
ž MgCl2和DMSO单独包装
ž 更灵活设计实验
ž 一管PCR预混液,减少操作步骤,避免加样误差
25 mM MgCl2 5kb 04-33-xxxxx
多重PCR HOT FIREPol® MultiPlex Mix ž 可以同时扩增多个目的片段
ž 一管PCR预混液,减少操作步骤,避免加样误差
10 mM 5kb 04-34-xxxxx
HOT FIREPol® MultiPlex Mix (上样即用型) 10 mM 5kb 04-36-xxxxx
高保真PCR HoT FIREPol® blend master mix ž 精确度优化的PCR,5倍保真度(与Taq酶相比),适合高需求的PCR检测
ž 一管PCR预混液,减少操作,避免加样误差
• 7.5mM
• 10mM
• 12.5mM
• 15mM
5kb 04-27-xxxxx
HOT FIREPol® MultiPlex Mix blend master mix(上样即用型) 5kb 04-25-xxxxx
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*扩增片段范围:可以扩增各种类型DNA模板的片段,如cDNA, λDNA,质粒DNA等,扩增片段<5kb; 以及多物种的基因组DNA (人、动物、植物等),扩增片段<3kb .

这些试剂盒有多好,性价比有多高呢? 一组漂亮的数据告诉你:

 

HOT FIREPol®GC含量预混液在GC含量高达79%的模板上表现良好!

 

GC含量

 

扩增多种高GC含量片段

使用高GC含量PCR预混液从人gDNA扩增出12种高GC的基因。 DNA模板和DMSO的终浓度分别为1 ng /μl和10%。

 

HOT FIREPol® 多重PCR 预混液进行4、8、14、18多重PCR检测, 表现敏感而特异!

 

HOT FIREPol® 多重PCR 预混液

 

多重PCR扩增

人类gDNA的不同基因在使用HOTFIREPol®MultiPlex Mix进行多重反应。扩增了122 bp到1340 bp的DNA片段,显示相似的高产量和高特异性,同时进行了4、8、14和18多重PCR检测。

 

HOT FIREPol®高保真PCR可以高度特异而准确的扩增多种长度DNA片段

 

HOT FIREPol®高保真PCR

 

当然还有优秀的参考文献:

 

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艾美捷科技有限公司通过提供完整的产品和服务体系、便利的客户关系和供应链管理,为生命科学研究工作者提供整体打包方案。我们的企业的核心价值观:“激情、敬业、学习、创新、合作、卓越”。激发我们内在的创造力,提供有竞争力的生物医学产品和服务,持续为客户创造最大价值是我们的企业使命。我们的企业愿景是成为受人尊重、世界一流的生物医学产品及服务供应商。

 

作为一家具有尖端的技术实力、一流的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业,总部位于武汉光谷国家级高新技术开发区,服务面向全国。艾美捷科技是集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品、整合的解决方案,及优质的物流服务。为了更好的服务客户,公司组建了一支经验丰富的研发团队-艾美捷生物技术中心,进入研发生产阶段,将更优质的产品推荐给国内生物领域的同仁们!

 

艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。

 

三点:

企业使命:激发我们内在的创造力,提供有竞争力的生物医学产品和服务,持续为客户创造最大价值。

企业愿景:成为受人尊重、世界一流的生物医学产品及服务供应商。

艾美捷定位:通过提供完整的产品和服务体系、便利的客户关系和供应链,为生命科学研究工作者提供整体打包方案。

 

六观:

价值观:激情、敬业、学习、创新、合作、卓越。

 

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