还在为高GC含量PCR犯愁吗?看这里

 

每天做实验小心翼翼,时时担心提取的DNA被污染、被降解。终于,废了九牛二虎之力,好不容易提取到高质量的DNA,然而PCR仍然P不出来条带。是试剂加漏了吗?是酶失活了吗?换上新试剂,冰上重来一次,然并卵,不仅P不出来,更重要的是也不知道为啥P不出来,贝多芬都弹不出我的悲伤!

 

算了,悲伤往事不再提,今天小编就总结教训,带你啃一啃PCR的这个硬骨头吧!PCR扩增不出来条带的原因有很多,诸如引物设计有误,DNA模板已降解,酶失活或者有杂酶污染,缓冲液条件不当,模板DNA的GC含量太高等等。大部分原因可以通过换试剂得到解决,但是对于高GC含量的样本,往往束手无策。

 

高GC含量样本

 

在DNA(A、T、C、G)4种碱基中,鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)所占的比率称为GC含量。因为G、C之间形成三对氢键,解链所需能量较高,所以模板很难打开,高GC含量(G+C≥60%)模板扩增中所面临的主要困难是模板中容易形成稳定的二级结构妨碍DNA聚合酶在模板上的推进,而且模板上可能存在多个非特异性的引物复性位点,导致非特异性扩增,甚至很多时候扩增不出靶基因。高GC含量的DNA序列广泛存在于不同物种的基因组中。人类高GC含量的DNA序列虽然只占了全基因组的3%,但有28%的基因位于这些区域内。此外,包括启动子和增强子在内的许多基因重要调控区域也大都由高GC含量的DNA序列组成。

 

目前,研究学者建立了各种不同的方法来解决高GC含量DNA模板扩增困难的问题,包括降落PCR、添加增强剂(如DMSO)等。虽然这些方法和手段的单独使用都获得了一定的效果,但是对于引物和模板的要求普遍过于苛刻,适用范围也比较局限,并不具有普遍适用性,而且往往经过多次摸索和尝试,也不易得到较好的结果。

 

pcr原理示意图

 

所以您还在为高GC含量PCR烦恼吗?您还在为扩增不出来结果而焦心吗?PCR试剂领军品牌Solis BioDyne可以为您轻松解决这个难题,可同时提供适合高GC含量PCR的预混液以及添加剂:

 

货号 名称 规格 特点
04-33-00115 5x HOT FIREPol GC Master Mix
高GC含量模板预混液
250rnx 适用于GC含量高至79%的模板;长度可扩增至5kb;非常稳定,可常温运输和操作
04-33-02015 5000rnx
05-16-00010 10x GC-rich Enhancer
高GC含量增强剂
1ml 高GC含量模板PCR的添加剂
05-16-00050 5ml

 

看到这儿,您心动了吗?马上联系小艾吧!

或者扫描下方二维码,即可联系您的专属客服哦~

 

 

艾美捷科技有限公司,通过提供完整的产品和服务体系、便利的客户关系和供应链管理,为生命科学研究工作者提供整体打包方案。我们的企业的核心价值观:“激情、敬业、学习、创新、合作、卓越”。激发我们内在的创造力,提供有竞争力的生物医学产品和服务,持续为客户创造最大价值是我们的企业使命。我们的企业愿景是成为受人尊重、世界一流的生物医学产品及服务供应商。

 

作为一家具有尖端的技术实力、一流的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业,总部位于武汉光谷国家级高新技术开发区,服务面向全国。艾美捷科技是集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品、整合的解决方案,及优质的物流服务。为了更好的服务客户,公司组建了一支经验丰富的研发团队-艾美捷生物技术中心,进入研发生产阶段,将更优质的产品推荐给国内生物领域的同仁们!

 

艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。

 

三点:

企业使命:激发我们内在的创造力,提供有竞争力的生物医学产品和服务,持续为客户创造最大价值。

企业愿景:成为受人尊重、世界一流的生物医学产品及服务供应商。

艾美捷定位:通过提供完整的产品和服务体系、便利的客户关系和供应链,为生命科学研究工作者提供整体打包方案。

 

六观:

价值观:激情、敬业、学习、创新、合作、卓越。

 

每日生物评论

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen: