琼脂糖&磁珠偶联的HA标签抗体,让免疫沉淀(IP)起飞

什么情况下会选择标签抗体用于免疫沉淀呢?

 

当某些目标蛋白没有对应的特异性抗体(eg.抗体所识别的抗原表位被相互作用蛋白所遮蔽,无法与目的蛋白相互作用或抗体选择不合适,所选抗体不能识别处于天然构象的蛋白)而无法进行免疫沉淀时,可以采用一个表位标记蛋白后,再选择针对此表位的标签抗体来进行免疫沉淀。

 

什么样的标签适合用于免疫沉淀呢?

 

HA标签系统利用一个HA (流感病毒血凝素,influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目标蛋白。HA标签可位于蛋白质的C端或N端,该系统已广泛应用于多种细胞类型,相应的HA标签抗体也被广泛应用。HA 标签抗体能特异识别C末端或N末端带有HA标签(HA-tagged)的融合蛋白,也可以用于检测和HA tag融合表达蛋白的表达、细胞内定位,以及纯化、定性或定量检测HA tag融合表达蛋白等。

 

为什么推荐使用HA标签抗体偶联的琼脂糖/磁珠?

 

与使用Protein A/G琼脂糖的传统免疫沉淀(IP)方法相比,Abbkine的琼脂糖/磁珠偶联标签抗体,省去了Protein A/G与抗原-抗体复合物结合的步骤偶联抗体直接和目标蛋白结合后,通过离心或使用磁力架,将目标蛋白从细胞裂解液中分离出来。不仅让实验变得简单快捷,更可以避免非特异性结合,降低背景。表位标记蛋白的免疫沉淀可用于确定蛋白的细胞定位、研究翻译后修饰或检测标记蛋白与其它蛋白之间的相互作用。

 

  • 看到这里,您肯定会问,Protein A/G的缺点是什么?
  1. 耗时:使用Protein A/G需要额外的孵育与洗涤操作
  2. 效果差:当抗体种属、亚型和ProteinA/G不匹配时,ProteinA/G和抗体结合能力弱
  3. 背景高:和样本中的其他免疫球蛋白结合,产生非特异性结合,导致高背景

 

这就是艾美捷科技为您推荐琼脂糖&磁珠偶联的HA标签抗体的原因:

 

产品名称 货号 应用
Anti-HA Tag Mouse Monoclonal Antibody, 琼脂糖 A02040AGB IP
Anti-HA Tag Mouse Monoclonal Antibody, 磁珠 A02040MGB IP

 

琼脂糖&磁珠偶联的HA标签抗体

 

琼脂糖/磁珠偶联HA标签抗体,优势更加突出:

 

  • 高特异性—高特异性单克隆标签抗体可实现高产量和高纯度免疫沉淀
  • 低背景—稳定、预封闭的填料及特异性抗体减少了免疫沉淀过程中的非特异性结合
  • 规格灵活:100ul, 400ul, 2ml,多规格可供选择。满足不同规模的免疫沉淀需求
  • 操作方便—产品说明书提供了免疫沉淀优化方案,一次免疫沉淀时间约1 - 2小时
  • 兼容性强—填料可以兼容手动及自动化操作

 

琼脂糖/磁珠偶联HA标签抗体使用说明:

  • 琼脂糖微球是多孔的,这使得它们具有高的表面积与蛋白质相互接触,并可以容纳大量的液体。在纯化大量蛋白的时候,传统的琼脂糖微球偶联抗体是IP实验的完美选择。(琼脂糖:每个样品加入20ul悬液)
  • 在IP实验中,由于所有的相互作用均发生在磁珠的外表面,并且磁珠的尺寸更均一,所以磁珠的可重复性和纯度通常高于琼脂糖。磁性分离不需要离心和多次洗涤,且孵育时间短,在日常小规模、快速处理多个样品的IP实验时,磁珠偶联抗体更简单、更快速。(磁珠:每个样品加入10-20ul悬液)
  • 提供形式:液体(抗体-琼脂糖/磁珠复合物:保护液=1:1,50%的悬浮液)
  • 储存方式:4°C可保存一年,琼脂糖偶联标签抗体避免冻融和涡旋;磁珠偶联标签抗体避免冻融和离心

 

说明书:

琼脂糖偶联HA标签抗体:https://www.abbkine.com/datasheet/A02040AGB.pdf

磁珠偶联HA标签抗体: https://www.abbkine.com/datasheet/A02040MGB.pdf

 

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