过氧化氢酶(CAT)的特异功能

在《传奇的抗氧化酶-SOD》一文中我们提到:SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子,它可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧,但体内的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)会立即将其分解为完全无害的水。这样,三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。今天我们再给大家介绍下SOD的得力助手-过氧化氢酶(CAT)。

 

过氧化氢酶(CAT),顾名思义是可以催化过氧化氢分解成氧和水的酶。然鹅,你要是认为它只能催化过氧化氢分解那就大错特错了,人家还有特异功能呢。听我给大家详细说说这种神奇的酶。

 

首先,作为一种物质,过氧化氢酶是在1811年被过氧化氢(H2O2)的发现者泰纳尔(Louis Jacques Thénard)首次发现。1900年,Oscar Loew将这种能够降解过氧化氢的酶命名为"catalase",即过氧化氢酶,并发现这种酶存在于许多植物和动物中。1937年,詹姆斯·B·萨姆纳将来自牛肝中的过氧化氢酶结晶,并在次年获得了该酶的分子量。1969年,牛的过氧化氢酶的氨基酸序列得以解出。而后,1981年,其三维结构得以解析。

 

过氧化氢酶,catalase,存在于植物和动物中

 

几乎所有的生物机体都存在过氧化氢酶。其普遍存在于能呼吸的生物体内,主要存在于植物的叶绿体、线粒体、内质网、动物的肝和红细胞中,其酶促活性为机体提供了抗氧化防御机理。CAT是红血素酶,不同的来源有不同的结构。在不同的组织中其活性水平高低不同。过氧化氢在肝脏中分解速度比在脑或心脏等器官快,就是因为肝中的CAT含量水平高。

 

CAT存在于细胞的过氧化物酶体内。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶, 约占过氧化物酶体酶总量的40%。过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中,特别在肝脏中以高浓度存在。过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。过氧化氢酶也被用于食品包装,防止食物被氧化。在纺织工业中,过氧化氢酶被用于除去纺织物上的过氧化氢,以保证成品是不含过氧化物的。它还被用在隐形眼镜的清洁上:眼镜在含有过氧化氢的清洁剂中浸泡后,使用前再用过氧化氢酶除去残留的过氧化氢。过氧化氢酶在美容业中的使用:一些面部护理中加入了该酶和过氧化氢,目的是增加表皮上层的细胞氧量。过氧化氢酶在实验室中还常常被用作了解酶对反应速率影响的工具。

 

反应机制

CAT作用于过氧化氢的机理实质上是H2O2的歧化,必须有两个H2O2先后与CAT相遇且碰撞在活性中心上,才能发生反应。H2O2浓度越高,分解速度越快。虽然过氧化氢酶完整的催化机制还没有完全被了解,但其催化过程被认为分为两步:

H2O2 + Fe(III)-E → H2O + O=Fe(IV)-E(.+)

H2O2 + O=Fe(IV)-E(.+) → H2O + Fe(III)-E + O2

其中,"Fe()-E"表示结合在酶上的血红素基团(E)的中心铁原子(Fe)。Fe(IV)-E(.+)为Fe(V)-E的一种共振形式,即铁原子并没有完全氧化到+V价,而是从血红素上接受了一些"支持电子"。因而,反应式中的血红素也就表示为自由基阳离子(.+).

 

过氧化氢进入活性位点并与酶147位上的天冬酰胺残基(Asn147)和74位上的组氨酸残基(His74)相互作用,使得一个质子在氧原子间互相传递。自由的氧原子配位结合,生成水分子和Fe(IV)=O。Fe(IV)=O与第二个过氧化氢分子反应重新形成Fe(III)-E,并生成水分子和氧气。活性中心铁原子的反应活性可能由于357位上酪氨酸残基(Tyr357)的苯酚基侧链的存在(帮助Fe(III)氧化为Fe(IV))而得以提高。反应的效率可能是通过His74和Asn147与反应中间体作用而得以提高。该反应的速率通常可以通过米氏方程来确定。

接下来,划重点:

过氧化氢酶也能够氧化其他一些细胞毒性物质,如甲醇、甲酸、苯酚和乙醇。这些氧化过程需要利用过氧化氢通过以下反应来完成:

H2O2 + AH2 → 2H2O + A

同样,具体的反应机制还不清楚。

没错,这就是CAT的特异功能,它也具有过氧化物酶活性,不仅可以催化过氧化氢反应,还可以顺带氧化其他的小分子有毒物质,而且必须在过氧化氢在场的情况下。

 

根据这个特性,在生化检测中有的公司已经开发出了利用CAT过氧化物酶活性的检测试剂盒。比如Cayman公司的货号为 700910的Catalase Assay Kit (without Hydrogen Peroxide)该试剂盒的原理是甲醇和过氧化氢在CAT的催化下反应生成甲醛和水,然后用能与甲醛反应显色的物质来测定生成的甲醛,测定CAT的活性。这样就完美避开了利用CAT的过氧化氢酶活性来测定CAT需要准确测定过氧化氢浓度的难题。由于过氧化氢不是非常稳定,使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度,需要测定240 nm的吸光度,比较麻烦。

 

Catalase,酶活性,检测试剂盒

 

咋样,这位小兄弟也是骨骼清奇吧?不仅能分解过氧化氢还能顺便干掉其他的小坏蛋。不过它也有宿敌,任何重金属离子(如硫酸铜中的铜离子)可以作为过氧化氢酶的非竞争性抑制剂。另外,剧毒性的氰化物是过氧化氢酶的竞争性抑制剂,可以紧密地结合到酶中的血红素上,阻止酶的催化反应。由于CAT催化机制还没有完全被了解,还有许多未解之谜等待大家去发现,欢迎关注我们的CAT检测试剂盒,很快就能与大家见面了,助力科研,敬请期待!

 

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