WB、PCR、ELISA…应使用哪种技术?

目前,针对分子生物学实验有多种技术方法,那么我们该如何判断选择哪种方法适合呢?我们需要去了解实验方法的特性。无非就是用某种特定的刺激物(如细胞活素)去刺激一些细胞或组织,让它们high起来,然后分析细胞对这些外源刺激物的反应,检测细胞内哪条信号通路被激活或失活,或者什么蛋白被分泌出来。每一种实验方法都有它的特性,下面就以下几种方法做介绍:

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什么时候用免疫印迹实验?

免疫印迹实验(Western Blot,WB)可检测信号通路中某种蛋白质的特性、表达和分布,分析容量大、敏感度高、特异性强。建立蛋白质的个人档案

但至于蛋白-蛋白相互作用则要用另一种更复杂的方法,即免疫共沉淀法(Co-immunoprecipitation,Co-IP),它接近细胞内的生理情况,是以成为经典方法。

 

什么时候用表面等离子体共振?

表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)除了研究蛋白-蛋白相互作用(例如受体-配体相互作用),还有可研究小分子-蛋白或细胞-蛋白的相互作用。这种方法不需要标记蛋白(荧光标记或同位素标记),还可以实时定量分析这些相互作用的亲和力、热力学、动力学特性。SPR是分析动力学和亲和力的金标准。

 

什么时候用电泳迁移率实验?

电泳迁移率实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)最初用于检测DNA结合蛋白与相应的DNA序列结合的情况,可做定性和定量分析,包括细胞核中的转录因子(如NF-kB )的活性等等,现在也常用于研究RNA结合蛋白和相应的RNA序列相互作用。

 

这些分析用酶联免疫吸附实验(EenzymeLinked ImmunosorbentAssay,ELISA)也可以做,原理差不多。

 

什么时候用聚合酶链式反应?

PCR(Polymerase Chain Reaction)或Real Time PCR可以把特定的DNA序列大幅扩增,便于检测活性基因的表达情况。而且PCR用途很广。

 

什么时候用酶联免疫吸附剂测定?

酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)如果要看看细胞外如何,比如细胞培养上清液或体液中的某种蛋白质分泌情况,则通常选用ELISA,从而获知相应基因的活性。

 

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