泛素化蛋白快速富集纯化黑科技—TUBEs

 

泛素化是一种常见的调节蛋白的稳定性和功能的翻译后修饰。蛋白的泛素化需要3种酶的参与,分别是泛素活化酶(ubiquitin-activating enzyme,E1)、泛素偶联酶(ubiquitin conjugation enzyme,E2)和泛素连接酶(ubiquitin ligase,E3)。在3种酶的作用下,泛素(ubiquitin,ub)分子的C端羧基与底物蛋白赖氨酸(Lys)残基的Ԑ氨基形成酰胺异构肽。同时,泛素也能发生泛素化修饰形成不同的泛素链,而不同的泛素链又介导不同的生物功能。泛素化修饰不仅参与底物蛋白的26S蛋白酶体降解过程,还参与基因转录、细胞周期、DNA损伤和免疫应激等生物过程。大规模富集泛素聚合物是研究泛素化系统的关键技术。传统的富集泛素化蛋白的常用手段是标签富集或者高亲和力抗体富集,这种基于抗体的泛素蛋白质组学对于大规模泛素化系统的研究是非常昂贵的,而且,目前市面上大多数供应商出售的泛素抗体是非选择性的,无法满足研究学者的多样需求。

 

泛素化蛋白快速富集纯化

 

泛素结合结构域(ubiquitin-binding domains,UBD)是一种可识别和结合泛素化修饰的蛋白小模块。根据结构域的不同可将UBD分为20个家族,这些UBD对泛素的亲和力不等(2~500umol),且存在泛素链的偏好性。UBD结合下的泛素化蛋白在胰蛋白酶的作用下,泛素化底物上的泛素化位点Lys由于泛素化产生一个带2个甘氨酸标签的分枝状漏切肽段,这2个甘氨酸标签是由于修饰的泛素分子的C末端通过异肽键与泛素化位点的Lys结合,经过胰蛋白酶消化后保留的残基。产生的信号肽在质谱信号中会产生一个114.043Da的质量跃迁,结合漏切的Lys位点,合称为GG-K信号肽,通过该信号肽结合数据库搜索引擎可实现对泛素化底物的鉴定。这也是高精度质谱技术实现泛素化底物鉴定的基础。

 

基于UBD对泛素的高亲和力,泛素研究专家LifeSensors已开发出利用串联泛素结合实体(Tandem Ubiquitin Binding Entities,TUBE)从细胞和组织裂解液中特异性分离富集泛素化蛋白的技术。TUBEs由多个UBDs串联构成,对泛素链亲和性极高,而且,TUBEs通过与泛素链的结合可以保护蛋白质不被去泛素化,同时避免靶蛋白发生蛋白酶体介导的降解,为研究泛素化蛋白质组学提供了很好的工具。

 

除了研发和生产可与所有类型的多聚泛素链结合的TUBE(pan-TUBE)之外,LifeSensors还开发了可选择性地与K48或K63或线性(M1)多泛素化蛋白结合的链特异性TUBE。

 

多泛素化蛋白结合的链特异性TUBE

 

TUBE产品优势

  1. 可快速有效的实现泛素化蛋白的富集和纯化
  2. 比单个UBA结构域的亲和力高1000倍
  3. 与泛素抗体相比有更高的特异性和亲和力
  4. 保护蛋白质不被去泛素化,同时可避免靶蛋白发生蛋白酶体介导的降解

 

TUBE

 

pan-TUBE——可与所有类型的多聚泛素链结合

标签类型 货号 名称
磁珠(Magnetic) UM401M TUBE 1 (Magnetic Beads)
UM402M TUBE 2 (Magnetic Beads)
琼脂糖珠(Agarose) UM401 TUBE 1 (Agarose)
UM402 TUBE 2 (Agarose)
生物素 UM301 TUBE 1 (Biotin)
UM302 TUBE 2 (Biotin)
GST UM101 TUBE 1 (GST)
His6 UM201 TUBE 1 (His6)
HRP UM312 TUBE 2 (HRP)
荧光(Fluorescein/Tamra) UM502F TUBE 2 (Fluorescein)
UM502T TUBE 2 (TAMRA)
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Selective TUBEs——与M1-线性多聚泛素链特异性结合

标签类型 货号 名称
His6 UM206 M1 TUBE (His6)
生物素 UM306 M1 TUBE (Biotin)
FLAG UM606 M1 TUBE (FLAG)

 

Selective TUBEs——与K48-多聚泛素链特异性结合

标签类型 货号 名称
磁珠(Magnetic) UM407M K48 TUBE HF (Magnetic Beads)
生物素 UM307 K48 TUBE HF (Biotin)
FLAG UM607 K48 TUBE HF (FLAG)
His6 UM207: K48 TUBE HF (His6)
GST UM107 K48 TUBE HF (GST)
荧光(Fluorescein/Tamra) UM507F K48 TUBE HF (Fluorescein)
UM507T K48 TUBE HF (TAMRA)

 

Selective TUBEs——与K63-多聚泛素链特异性结合

标签类型 货号 名称
磁珠(Magnetic) UM404M K63 TUBE (Magnetic Beads)
生物素 UM304 K63 TUBE (Biotin)
FLAG UM604 K63 TUBE (FLAG)
荧光(Fluorescein/Tamra) UM504F K63 TUBE (Fluorescein)
UM504T K63 TUBE (TAMRA)

 

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