直击免疫沉淀痛点,Rockland热销TrueBlot系列IP产品等你来!

 常规免疫沉淀(IP)的痛点:

免疫沉淀(IP)后的免疫印迹(WB)过程中必然涉及到免疫沉淀用一抗(多为IgG)的变性,因此如果使用传统的二抗(非还原和还原型的IgG均能检测到)会在印迹膜上出现杂带的干扰,也就是说,由于传统的二抗能与还原型的IgG结合,在印迹膜上显示出~55kDa的重链条带和~23kDa的轻链条带,这些均为非特异性条带,对免疫印迹结果的分析带来很大干扰。

 

为什么要选择TrueBlot ?

TrueBlot®产品线旨在解决在对免疫沉淀 (IP) 或共免疫沉淀 (Co-IP) 样品进行蛋白质印迹时遇到的常见实验问题。TrueBlot®二抗的独特检测特性可识别天然(非还原)形式的 IgG而不是还原形式的 IgG,以消除 IP 抗体变性重链和轻链的干扰,当与TrueBlot® IP微珠搭配使用时,TrueBlot®产品系列可助您轻松获得可重现的、出版质量的IP/Co-IP-Western印迹结果。

 

TrueBlot产品介绍及结果展示:

  1. HRP标记TrueBlotTM系列二抗

TrueBlotTM系列二抗为美国ROCKLAND公司的专利产品,因为TrueBlotTM系列二抗能够特异性的结合带有天然二硫键结构的IgG(Goat, Mouse或Rabbit),因此能够仅检测非还原型的IgG(一抗IgG天然构象)

 

使用TrueBlotTM系列二抗则可避免上述情况,特异地检测出免疫沉淀而得的抗原(如下图)。

 

TrueBlotTM系列二抗
当使用IP分离蛋白时,捕获抗体与目标蛋白质结合(Step 1),添加Protein A 或Protein G 包被的磁珠以固定抗体-目标蛋白质复合物(Step 2)并洗掉不需要的材料(Step 3)。常规IP中的最后步骤通常包括使用加热和还原/变性剂使蛋白质变性(Step 4)。

 

当洗脱的IP样品通过SDS-PAGE分离(Step 5),后续Western blot中使用的相同一抗进行检测,然后分别使用常规二抗和TrueBlotTM二抗检测时,结果表面:使用常规二抗检测时,捕获抗体的重链和轻链都可以检测到(Step 5 右图),这可能会掩盖您感兴趣的蛋白,特别是如果它的大小与IgG重链或轻链相近时,使用TrueBlotTM二抗检测时,只检测到特异性的目的蛋白(Step 5 左图)。

用anti Mouse IgG TrueBlotTM检测结果
用anti Mouse IgG TrueBlotTM检测结果 用传统的HRP标记anti-Mouse IgG二抗进行检测结果

 

由结果可知:用传统的HRP标记二抗检测时会出现轻链和重链条带,而用TrueBlotTM二抗检测时则没有,表明TrueBlot®二抗仅识别天然(非还原)状态的一抗,消除重链和轻链条带的干扰,以为免疫沉淀样品提供准确、出版质量的WB结果。

 

  1. 荧光标记TrueBlot二抗:

Fluorescent TrueBlot是一款功能强大、特异性高的产品,可与近红外染料搭配使用。

荧光标记TrueBlot二抗
Fluorescent TrueBlot®:Anti-Rabbit IgG DyLight™ 680的western blo结果:
Lane 1: Rabbit IgG, 非变性.
M: Marker.
Lane 2: Rabbit IgG, 变性.

 

  1. TrueBlotTM系列微球
TrueBlotTM系列微球
Mouse TrueBlot IP琼脂糖珠VS传统IP磁珠

 

TrueBlot产品特点:

1、完全排除的免疫沉淀用一抗重轻链的干扰,结果清晰、准确,特异性强;

2、使用简单,仅将传统的二抗替换成TrueBlotTM系列二抗即可。

注意要点:

1、需对免疫沉淀物进行彻底还原;

2、免疫印迹时需用牛奶作为封闭液,而不能用BSA(牛血清白蛋白),因为后者的封闭作用不强;

3、当用Rabbit IgG TrueBlotTM对免疫印迹膜进行检测时,要先用anti-IgG微球来进行免疫沉淀步骤,而不能使用Protein A或Protein G微球,因为后者与Rabbit IgG有很强的亲合力,会引起污染。

 

TrueBlot系列产品推荐:

类别 货号 产品名称 规格
免疫沉淀后WB用抗体 RKL-18-8817-30 Mouse TrueBlot ULTRA: Anti-Mouse Ig HRP 20uL
RKL-18-8817-31 Mouse TrueBlot ULTRA: Anti-Mouse Ig HRP 50uL
RKL-18-8817-33 Mouse TrueBlot ULTRA: Anti-Mouse Ig HRP 200uL
RKL-18-8816-31 Rabbit TrueBlot ULTRA: Anti-Rabbit Ig HRP 50uL
RKL-18-8816-33 Rabbit TrueBlot ULTRA: Anti-Rabbit Ig HRP 200uL
RKL-18-8814-31 Goat TrueBlot ULTRA: Anti-Goat Ig HRP 50uL
RKL-18-8814-33 Goat TrueBlot ULTRA: Anti-Goat Ig HRP 200uL
RKL-18-0217-32 Fluorescent TrueBlot Anti-Mouse Fluorescein 100uL
RKL-18-4417-32 Fluorescent TrueBlot Anti-Mouse DyLight 680 100uL
RKL-18-4517-32 Flourescent TrueBlot Anti-Mouse DyLight 800 100uL
RKL-18-0216-32 Fluorescent TrueBlot Anti-Rabbit Fluorescein 100uL
RKL-18-4416-32 Fluorescent TrueBlot Anti-Rabbit DyLight 680 100uL
RKL-18-4516-32 Fluorescent TrueBlot Anti-Rabbit DyLight 800 100uL
IP用微球(琼脂糖珠/磁珠) RKL-00-8811-25 TrueBlot Anti-Mouse Ig IP Agarose Beads 2.5uL
RKL-00-8800-25 TrueBlot Anti-Rabbit Ig IP Agarose Beads 2.5uL
RKL-00-8844-25 TrueBlot Anti-Goat Ig IP Agarose Beads 2.5uL
RKL-00-1811-20 TrueBlot Anti-Mouse IgG Magnetic Beads 2uL
RKL-00-1811-50 TrueBlot Anti-Mouse IgG Magnetic Beads 5uL
RKL-PA00-18-2 TrueBlot Protein A Magnetic Beads 2mL
RKL-PA00-18-5 TrueBlot Protein A Magnetic Beads 5mL
RKL-PG00-18-2 TrueBlot Protein G Magnetic Beads 2mL
RKL-PG00-18-5 TrueBlot Protein G Magnetic Beads 5mL
RKL-S000-18-2 TrueBlot Streptavidin Magnetic Beads 2mL
RKL-S000-18-5 TrueBlot Streptavidin Magnetic Beads 5mL
RKL-B000-18-2 TrueBlot Biotin Magnetic Beads 2mL
RKL-B000-18-5 TrueBlot Biotin Magnetic Beads 5mL
RKL-TMS-06 TrueBlot Anti-Goat Ig IP Agarose Beads 6 tests
RKL-88-7788-31 Mouse TrueBlot Set (IP Agarose Beads) 50uL
RKL-88-1688-31 Rabbit TrueBlot Set (IP Agarose Beads) 50uL
RKL-88-1488-31 Goat TrueBlot Set (IP Agarose Beads) 50uL
IP及其后WB检测用试剂盒 RKL-88-8887-31 Mouse TrueBlot Western Blot Kit 50uL
RKL-88-8886-31 Rabbit TrueBlot Western Blot Kit 50uL
RKL-88-8884-31 Goat TrueBlot Western Blot Kit 50uL
RKL-88-8887-215 IP & WB Kit for GFP Epitope Tag 1 Kit
RKL-88-8887-382 IP & WB Kit for 6X HIS Epitope Tag 1 Kit
RKL-88-8887-383 IP & WB Kit for DYKDDDDK (FLAG) Epitope Kit 1 Kit
RKL-KBA-PA00-18 TrueBlot Protein A Magnetic Beads IP/Co-IP Kit 20 tests
RKL-KBA-PG00-18 TrueBlot Protein G Magnetic Beads IP/Co-IP Kit 20 tests

*上述产品仅限用于科研学术研究用途,不得用于医疗与诊断。

 

如何做好IP/Co-IP实验,TrueBlot产品选择指南:

TrueBlot IP/Co-IP实验

 

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来源:Rockland热销TrueBlot系列IP产品,真IP无干扰

 

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