trFluor 链霉亲和素——适用于TR-FRET的荧光染料

 

时间分辨荧光

 

理论上,荧光是最灵敏的检测手段,由于许多分子间和分子内的变化会改变标记物的荧光发射。因此,很早就把它作为均相分析技术可能的新的手段。而现在偏振,淬灭,时间关联,荧光寿命改变以及荧光共振能量转移(FRET)已经被广泛应用在对分子间作用的研究中。

 

在生物溶液或血清中的很多化合物和蛋白质是自发荧光的,利用传统的快速荧光基团进行检测极大的限制了实验灵敏度。使用长寿命的荧光基团结合时间分辨的检测方式(在荧光激发和发射检测之间有一个时间延迟)可将快速荧光的干扰降到最低。

 

时间分辨荧光(TRF)利用稀土元素中镧系元素的独特性质。再TRF中常用的镧系元素是钐(Sm)、(Eu)、铽(Tb)、镝(Dy)。与传统荧光基团相比,他们具有大的斯托克位移,和非常长的发射半衰期(从微妙到毫秒),这使它们在生物学荧光应用领域中日益重要。

 

通过直接激发使镧系元素离子产生荧光是不容易的,因为这些离子很难吸收光子,镧系元素必须首先与有机分子形成复合物,有机分子收集光子并通过分子内非放射性过程转移到镧系元素上。稀土元素螯合物和穴状配合物是能量收集装置的典型代表,他们收集能量并转移到镧系元素离子上,后者则发出其特征性的长寿命荧光。

 

为了能够成功应用于生物学检测中,稀土元素复合物应该具有特定的性质,包括稳定性。较高的发射光产率,并且能够与生物分子进行连接。除此之外,当直接在生物溶液中进行反应时,能够耐受荧光淬灭就显得尤为重要。稀土元素螯合物稳定性较差,而且有的化合物可竞争螯合物活性基团,当与FRET技术结合在一起时其灵敏度也会收到限制。如果稀土元素与穴状物结合,许多限制因素都可去除。

 

时间分辨荧光

 

荧光共振能量转移(FRET):

 

荧光共振能量转移是指在两个不同的荧光基团中,如果一个荧光基团(供体 Donor)的发射光谱与另一个基团(受体 Acceptor)的吸收光谱有一定的重叠,当这两个荧光基团间的距离合适时(一般小于100Å),就可观察到荧光能量由供体向受体转移的现象,即以前一种基团的激发波长激发时,可观察到后一个基团发射的荧光。

 

荧光共振能量转移

 

在荧光共振能量转移中,受体发射荧光的寿命等同于供体的发射荧光的寿命。因为Eu的荧光衰减周期较长,所以含Eu的供体会诱导XL665受体长时间地发射荧光,受体激发后产生的荧光便能持续较长时间,这样通过时间分辨就可以区分那些短寿命的自身散射的荧光,这样从短寿命荧光背景中就很容易区分出FRET信号。

 

当由于生物分子相互作用导致两个荧光基团接近时,在激发时被穴状化合物捕获的部分能量释放,发射波长为620nm;另一部分能量转移到受体(acceptor)上,发射波长为 665nm。665nm的发射光仅仅由供体(donor)引起的FRET产生。所以,当生物分子相互作用时,有两个激发光620nm和 665nm;当不存在相互作用时,只有620nm一个激发光。

 

艾美捷科技为您推荐AAT Bioquest的 trFluor 链霉亲和素缀合物,这种缀合物通常与生物素化的二抗结合使用,可作为间接免疫荧光染色的第二检测试剂。同时它们是利用TR-FRET平台进行生物素-链霉亲和素的生物学测定非常有价值的工具,trFluor 链霉亲和素偶联物由trFluor和链霉亲和素组成,trFluor Eu或trFluor Tb共价附有时间分辨的红色荧光euro(Eu)标记或绿色荧光ter(Tb)标记。

 

trFluor 染料的主要特点:

1.无需添加氟化物或增强溶液。

2.适用于多种反应形式。

3.比其他TRF染料更容易与生物分子偶联,具有更高的偶联产率。

4.在〜350 nm处被普通光源最大程度地激发。

 

trFluor 染料

 

使用trFluor 标记的链霉亲和素偶联物进行TR-FRET测定原理

 

时间分辨发光探针的典型受体

 

trFluor 供体 推荐受体
trFluor Eu琥珀酰亚胺酯(1433 iFluor 647马来酰亚胺(1065
Tide Fluor 5马来酰亚胺(2280
别藻蓝蛋白APC(2554
trFluor Tb马来酰亚胺(1444 iFluor 488琥珀酰亚胺酯(1023
Tide Fluor 2酸(2245
FITC-xtra 异硫氰酸荧光素(135

 

美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest,Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域,包括吸收(颜色),荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学,免疫学,细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断介绍新产品,快速的丰富各个领域的产品。

 

作为AAT Bioquest Inc.的中国区域代理,艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测领域,包括吸收(颜色),荧光和发光技术等全系列解决方案。我们也将一如既往更加努力为国内用户提供快捷、方便的高质量产品,同时更为您售前售后全面技术支持。

 

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