生物体内过氧化氢含量测定的不同方法

 

过氧化氢(Hydrogen peroxide)

化学式: H2O2过氧化氢含量测定,过氧化氢含量,H2O2过氧化氢含量测定,过氧化氢含量,H2O

相对分子质量: 34.01

结构式:

 

 

说到过氧化氢,可能很多小伙伴会想就是实验室里那种俗称双氧水,外观为无色透明需要避光的液体。它是一种强氧化剂,其水溶液适用于医用伤口消毒及环境消毒和食品消毒。然鹅,过氧化氢可没这么简单,它在生物体内广泛存在,而且是一种关键的调节因子。过氧化氢含量与细胞状态有密切关系呢。

 

可能有人不理解这种强氧化剂咋会在生物体内存在,我们就来说说:

 

过氧化氢是生物体内最常见的活性氧分子,是一种活性氧代谢的副产物,主要由 SOD 和 XOD 等催化产生,由 CAT 和 POD 等催化降解。过氧化氢不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2 可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面 过氧化氢也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。过氧化氢可以激活NF-κB等因子,这些过氧化氢相关的信号途径和哮喘、炎症性关节炎、动脉硬化以及神经退行性疾病等许多疾病相关。过氧化氢也和细胞凋亡、细胞增殖等密切相关。

 

看来过氧化氢在生物体内确实发挥重要作用呢,所以过氧化氢含量的测定就有重要的意义。我们下面简单介绍几种常用的测定过氧化氢的方法:

 

一、二甲酚橙(xylenol orange)法

 

这种方法在国内应用比较广泛,有明显的优势。

 

原理:过氧化氢氧化二价铁离子产生三价铁离子,二甲酚橙(xylenol orange)高选择性的结合三价铁离子形成有色(紫色)产物,可用比色法在580nm处测定。从而实现对过氧化氢浓度的测定。

 

由于二甲酚橙(xylenol orange)作为一种金属离子络合指示剂,与三价铁离子的结合有很高的选择性,也就是该方法有很好的特异性。同时该反应需要在酸性条件下进行,可以消除很多物质的干扰。

 

二、硫酸钛比色法

 

这也是国内一种比较常见的方法。

 

原理:H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在 415nm 有特征吸收。

 

该方法原理简单易懂,但样本处理需要自备丙酮用来破碎细胞、匀浆组织和稀释液体样本。丙酮易挥发,而且易燃有毒,给操作带来一定困难,需要做好防护措施。

 

三、探针法

 

这是目前国外一种常用的测定过氧化氢含量的方法。

 

原理:在辣根过氧化物酶(HRP)存在的条件下,特异的 探针与过氧化氢反应,生成有色产物在570nm有最大光吸收,也可产生红色荧光(Ex/Em=535/587 nm)。比色法与荧光法灵敏度不同,需要配制不同的标准曲线。

 

该方法需要用到特异性的荧光探针,反应原理较前面2种复杂,但灵敏度很高,在荧光法中灵敏度可达40 nM。

 

四、过氧化物酶底物法

 

这是一种国外不太常见的方法。

 

原理:用一种独特的过氧化物酶底物测定溶液和细胞提取物中的过氧化氢 ,在辣根过氧化物酶(HRP)存在的条件下,过氧化氢氧化无色的过氧化物酶底物,产生强烈的蓝色。在 650nm有特征吸收。

 

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