半抗原载体蛋白常见种类介绍

半抗原是指与目标分析物结构相同或相似,并具有反应活性基团的低分子质量有机物。半抗原须与大分子物质连接后才能刺激动物产生抗体,因此需要首先合成可直接与载体(一般为蛋白质)偶联,并能最大程度模拟待测分子结构的半抗原。理想的抗原,一方面应具备待测物的特征结构,特别是立体化学结构,另一方面与载体连接后应保持该特征结构能最大程度的为免疫活性细胞识别和结合,以制备出具有预期选择性和亲和性的抗体。那么常见的与半抗原结合的载体蛋白有哪些呢?其各有哪些特点?

 

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1、牛血清白蛋白 BSA

 

BSA是最常用的载体蛋白。其物化性质稳定,不易变性,价廉易得,且赖氨酸含量高,分子内有很多自由的氨基,在不同的pH值和离子强度下均有较大的溶解度,在含有有机溶剂(如吡啶、N,N-二甲基甲酰胺等)的情况下都能与半抗原修饰物进行偶联。据报道,每分子BSA含有60个游离氨基可以和合成半抗原的羧基反应形成肽键,合成免疫原。与此类似的还有人血清白蛋白(HSA)、兔血清白蛋白、卵清白蛋白(OVA)等,用于不同的免疫动物。

 

2、匙孔血蓝蛋白(KLH)

 

KLH是一种蛋白大分子,其与脊椎动物免疫系统具有很好的异源性,被认为是优先选择的载体,在外文文献中使用较多,但其价格昂贵,一般只用于免疫原。且KLH激发的B淋巴细胞克隆中针对自身抗原决定簇的多,相对减少了针对半抗原的B淋巴细胞克隆,增加了阳性克隆筛选的难度和工作量。

 

3、其他

 

如甲状腺球蛋白、纤维蛋白原、明胶等也可以作为载体蛋白。但明胶是直链,结构简单,作为载体蛋白免疫源性较差,需要多次免疫。

近年来,也有报道用人工合成多聚肽(常用多聚赖氨酸PLL)为载体蛋白,其优点是可增加半抗原的免疫源性。

总之,在选择载体蛋白时,因综合考虑分子量、活性基团、溶解度、来源及价格等因素。

 

特别注意的是人工抗原的合成半抗原与载体蛋白的偶联物,若用于免疫动物,即为免疫原,若用于免疫分析中包被反应板,即为包被原。对于同一种目标分子,免疫原和包被原通常不用同一种偶联物,目的是减少抗体对包被原的非特异性结合,提高分析的特异性和灵敏度。因为人工抗原免疫动物所产生的抗体,不仅能识别半抗原,也能识别载体蛋白。因此,免疫原和包被原所用的载体蛋白一般是不相同的,载体蛋白的结构和分子质量差异越大,非特异性结合反应越弱,分析灵敏度越高。

 

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