在前面的《葡萄糖氧化酶(GOD)在生化和临床上的应用》一文中我们给大家简单提到了血糖测定的临床意义,现在我们再给大家说说葡萄糖的生理功能和测定的常用方法。
一.葡萄糖的生理功能
葡萄糖是自然界分布最广且最为重要的一种单糖,含有五个羟基和一个醛基,具有多元醇和醛的性质。口服后迅速吸收,进入人体后被组织利用,也可转化成糖原或脂肪储存。正常人体每分钟利用葡萄糖的能力为每公斤体重6毫克。是一种能直接吸收利用,补充能量的碳水化合物,是人体所需能量的主要来源。葡萄糖在体内被氧化成二氧化碳和水,并同时生成能量货币-ATP。生成的ATP可供人体各种生命活动需要,是生物体内最为常见的能源物质。葡萄糖也可以糖原的形式储存,能促进肝脏的解毒功能,对肝脏有保护作用。
二.葡萄糖测定的常用方法
葡萄糖测定方法可以分为:无机化学法、有机化学法和酶法。其中无机化学法由于操作复杂、需制滤液、特异性差、受还原物质影响等缺点已经逐渐被淘汰。有机化学法主要是邻甲苯胺(O-T)法。酶法包括葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法。每种方法各有不同的优缺点。葡萄糖氧化酶法准确度和精密度符合临床要求,操作简便,是血糖测定的常规检验方法,也可用于脑脊液葡萄糖浓度测定,特异性不如己糖激酶法,易受还原性物质如胆红素、抗坏血酸和尿酸等的影响。己糖激酶法为国际临床化学和实验室医学联盟(IFCC)推荐的参考方法,其结果不受轻度溶血、黄疸、肝素等因素干扰,可用于尿糖定量检测。不同样本的葡萄糖测定可为相关疾病诊断、疾病情况及治疗效果评提供参考,长期血糖监测可评估糖尿病治疗血糖的控制情况,并可据此调整治疗方案。而邻甲苯胺(O-T)法测定血糖是特异性最高的非酶法。
- 邻甲苯胺(O-T)法原理
葡萄糖在热的醋酸溶液中,与邻甲苯胺缩合成雪夫氏碱(Schiff base)。雪夫氏碱呈蓝绿色,其最高吸收峰为630nm波长,颜色深浅与葡萄糖含量呈正比。反应式如下:
- 葡萄糖氧化酶法原理
GOD利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase,POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
由于Trinder反应特异性较差,一些还原性物质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等,可与色原性物质竞争过氧化氢,从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢,产生竞争性抑制,使测定结果偏低。左旋多巴100mg/L,维生素C 5mg/L以上,谷胱甘肽100mg/L时,可引起负误差;半胱氨酸达10mmol/L时,产生相当0.72mmol/L葡萄糖的正误差。所以有的厂家改变了显色物,衍生出其他方法。
- 己糖激酶法原理
葡萄糖在己糖激酶和镁离子存在下可同腺嘌呤三磷酸腺苷(ATP)反应,其产物葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化下可使NADP+还原为NADPH。测定NADPH在340nm处生成量,其生成量与标本中葡萄糖含量成正比。