弗氏佐剂(Freund's Adjuvant)是目前常用于动物实验的佐剂,包括弗氏不完全佐(FIA/IFA/FICA)和弗氏完全佐剂(FCA/CFA)。
- 弗氏不完全佐剂(FIA/IFA/FICA)
将抗原水溶液与油剂(石蜡油或植物油)等量混合,再加乳化剂(羊毛脂或叶吐温80)制成油包水抗原乳剂,称之为弗氏不完全佐剂。制备方法:不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成,组分比为1~5:1,可根据需要而定,通常为2:1。
- 弗氏完全佐剂(FCA/CFA)
在不完全佐剂中加入分枝杆菌(如死卡苗)则称为弗氏完全佐剂。制备方法:不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2~20mg/ml)或死的结核分枝杆菌。
一般首次注射时用1/2体积FCA加上1/2体积的抗原进行乳化,第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。如不加佐剂,则抗原量增大10-20倍。 在免疫动物前,先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合,佐剂和抗原体积比一般为1:1,制备成 "油包水"乳状液。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物,注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异,无统一标准和固定模式。一般是每兔(约2kg重)或每羊(约20kg重)第1次注射抗原1mg,以后逐次增加抗原量,最多每次不超过3mg。
佐剂与抗原乳化可按如下方法进行
(1) 研磨法:先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内,待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液,边滴边按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,继续研磨一段时间,使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。本法适于制备大量的佐剂抗原,缺点是研钵壁上粘附大量乳剂,抗原损失较大。
(2) 注射器混合法:将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内,两注射器之间以一细胶管相连,注意排净空气,然后交替推动针管,直至形成粘稠的乳剂为止。本法优点是容易做到无菌操作,抗原损失少,适用于制备少量的抗原乳剂。但同时难以乳化完全,个别抗原,用塑料注射器根本推不动,而用玻璃注射器又有渗漏。制备好的乳化剂经鉴定才能适用。鉴定方法是将乳化剂滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴状浮于水面,即乳化完全,为合格的油包水剂。
(3) 超声:实验室条件好点的,比如说有超声破碎仪的,一定要控制超声频率和时间,超声容易激发一些自由基,对抗原有未知损害。乳化方法要根据抗原和需要而定。
弗氏佐剂可用于产生免疫原的油包水乳剂。油包水乳剂中的抗原可刺激高且持久的抗体应答,而这可归因于抗原的缓慢释放。
弗氏完全佐剂中的分枝杆菌可将巨噬细胞和其他细胞吸引到注射部位,从而增强免疫应答。鉴于此原因,将弗氏完全佐剂用于初始注射,而将弗氏不完全佐剂用于随后的加强注射。
弗氏(不完全)佐剂缺乏在弗氏完全佐剂中发现的分枝杆菌,因此它可以最大限度地减少副作用。它用于增强注射。它用于乳化注射到动物体内的抗原,从而抗血清中产生单克隆抗体。