特色彗星检测试剂盒-Comet SCGE assay kit方案来啦

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彗星实验（Comet assay）也被称为单细胞凝胶电泳实验（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一种在单细胞水平上检测DNA损伤的技术。当各种内源性和外源性DNA损伤因子（氧化和环境压力等）诱发细胞DNA链断裂时，其超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA以及其他成分均扩散到电解液中，而核DNA由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。电泳过程中，如果DNA没有损伤，则将停留在原位，染色后呈圆形的荧光团，无拖尾出现。如果DNA受损，断裂的碎片进入到凝胶中，在电场的作用下，DNA碎片离开原位向阳极迁移，形成拖尾。DNA受损越严重，断裂越多，产生的碎片就越多、越小，则向阳极迁移的DNA碎片量就越多，迁移距离也越长，荧光染色后就能看见“彗星”样尾长并且荧光强度增强。

艾美捷科技作为专业的生命科学领域解决方案供应商，为您推荐Biogradetech品牌特色的彗星检测试剂盒——彗星法DNA损伤分析试剂盒（货号：D-AKE3040-15T）。产品仅限用于科研学术研究用途，不得用于医疗与诊断。

D-AKE3040-15T彗星检测试剂盒内提供了彗星分析所需的所有必需试剂，包括裂解液（Lysis Solution）、彗星分析凝胶、荧光染料、彗星分析玻片等其它试剂。

彗星检测试剂盒的介绍&原理：

该分析的原理是基于变性、断裂的DNA片段在电场的影响下迁移出细胞的能力，而未受损的DNA迁移较慢并在施加电流时保持在类核范围内。对DNA“彗星”尾部形状和迁移模式的评估可以用来评估DNA损伤。在该测定中，细胞被固定在彗星玻片上的琼脂糖床中。在温和的细胞裂解后，用碱处理样品以解开DNA并使DNA变性。然后将样品进行电泳并用荧光DNA嵌入染料进行染色。然后通过荧光显微镜观察样品。对于那些没有荧光显微镜的研究人员来说，银染是一种选择，它允许用标准的光显微镜进行数据分析。

电泳步骤可以使用TBE buffer或碱性电泳溶液进行。TBE避免了与使用无缓冲碱进行电泳相关的问题，例如由于钠离子的电荷饱和而导致DNA迁移不良以及难以控制电压。TBE是分析细胞凋亡的首选，并且可以使用尾长而不是尾矩进行数据分析。碱性电泳更灵敏，可以检测到更少量的损伤。以非常低的电流运行时，电泳时间可延长至40分钟。如果根据彗星尾部长度的大小对彗星进行评分，则可以对数据进行定性分析。使用计算尾长和尾矩的几种商业可用的图像分析软件包之一分析结果，可以很容易地生成定量和统计数据。

Enzo的彗星SCGE实验的彗星玻片经过特殊处理，以促进低熔点琼脂糖的粘附。这消除了耗时和不可靠的传统方法制备琼脂糖基层胶。彗星玻片的使用缩短了分析时间，允许对大量样品进行快速可靠的分析。

目前有两种常见的彗星实验检测方式——碱性处理&中性处理。在碱性处理条件下，DNA发生变性，因而可检测包括单链及双链断裂在内的所有DNA损伤；在中性处理条件下，DNA维持双链构象，因而主要检测双链断裂。

彗星检测试剂盒的优势：

（1）即用型彗星玻片无需预处理即可直接应用样品；

（2）更短的测定时间允许更高通量的样品分析；

（3）疏水屏障允许使用DNA修复酶处理样品；

（4）与溴化乙锭相比，独特的核酸染料可提高DNA可视化的灵敏度。

彗星检测试剂盒的应用：

	阴性对照：CaSki细胞未经处理。进行彗星SCGE检测并使用FITC滤光片对玻片进行成像。
	阳性对照：CaSki细胞在 4°C下用100mM过氧化氢处理20分钟。进行彗星SCGE检测并使用FITC滤光片对玻片进行成像。