五种不同的制备siRNA方法的比较

比较项目 化学合成 体外转录 RNase III降解dsRNA siRNA 表达载体 PCR 表达框
材料需求 21-mer RNA oligos(一对) 29-mer DNA oligos(一对) 转录模版 (200-1000bp,两侧带T7 启动子) 55-60-mer DNA oligos(一对) ~50-mer DNA oligos(一对)
全部制备/合成时间所需时间 4天—2周 24 小时 + DNA oligo合成时间 1 天 + 转录模版制备时间 5天以上 + DNA oligo合成时间 ~ 6 小时 + DNA oligo合成时间
个人所需操作时间 几乎不需要* 中等 中等 多 中等
是否需要验证和寻找最有效siRNA 需要 需要 不需要 需要 需要
能否标记siRNA (例如用于 荧光显微镜 分析siRNA进入细胞过程或者在细胞中的定位) 能 能 能 不能 不能
转染的相对难易程度 好 好 好 差 差
可筛选性 (例如 抗生素 筛选) 不可以 不可以 不可以 可以 不可以
能否用于长效抑制 不可以 不可以 不可以 可以( 抗生素 筛选) 不可以
能否大规模制备 可以 有限 有限 可以 有限
检测总体转染效率 不可以 不可以 不可以 可以 不可以
每个基因的相对费用(不包含人力) 高 中等 低 中等 中等
*取决于合成后是否包含纯化、去保护,以及厂家提供的是已经退火的即用型双链还是冻干的单链

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