心心念念的周四又来了，不久前亚科因的组织了一场如火如荼的免疫病理实验学习，激起了不少好奇宝宝们的学习兴趣。大家纷纷留言，病理实验里面还有免疫组化、病理检测等方面的内容，还有很多病理知识没有给大家展现出来。看到大家留下的问题，小编在后续将会在亚科因微信平台，一一为大家揭晓。在这一期，小编将会从浅入深，从组织切片的知识开始为大家展开。
说到组织切片，大家就会有许多疑问了，下面就对大家的疑问进行逐一解析：
- 什么是组织切片呢？
切片(qie pian)玻片标本的一种。供光学显微镜或电子显微镜观察的动植物组织薄片。因要求不同，可用刀片进行徒手切片，也可将组织块包埋于石蜡或火棉胶中或以低温冰冻，用切片机切片。切成5~10微米薄片，供光学显微镜观察。用环氧树脂或甲基丙烯酸包埋组织块切制的超薄切片，其厚度在20~50纳米，专供在电子显微镜下观察。一般教学用的如根尖、茎的切片通称石蜡切片。
- 组织切片的实验步骤包括哪些环节呢？
- 组织切片的组织标本的初始形态是什么样子？
组织块的大小:所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1~0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ~0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
- 如何进行组织脱水透明？
标本经过固定和冲洗后，组织中含有较多的水分，必须将组织块内的水分置换出来，这一过程叫做脱水。无论是用石蜡切片，还是用火棉胶切片，都必须除去组织中所含水分，因含水组织与石蜡、火棉胶等包埋材料不相容，常用的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇。
脱水的步骤是:80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时，此过程可用脱水机自控完成。
丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂，但因其脱水能力很强，对组织有剧烈收缩作用，在制作科研、教学切片时一般不用该试剂。因乙醇、丙酮等不溶于石蜡，还要经过一个能溶于石蜡的溶剂替代过程称为透明。常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、水杨酸甲酯等。
- 如何进行浸蜡、包埋、切片、贴片？
(1)修整蜡块:可视其组织的大小，在组织边缘约0.1~0.2cm处，切去余蜡部分，否则易造成组织皱缩不平。
(2)准备好切片用具:切片刀、毛笔、眼科镊子(弯)、漂烘温控仪
(3)安装蜡块:将修好的蜡块安装在金属或木制持蜡器上。
(4)安装切片刀:将切片刀安装在切片机的刀台上，把刀台上的紧固螺丝旋紧，使切片时不产生振动，能保持一定的切片厚度。
(5)切片的厚度:切片机的厚度调节器上刻有0~50μm或0~25μm，可任意选择其厚度，石蜡切片的厚度一般在4~6μm。
(6)切片
(7)铺片:用眼科镊子镊起蜡带轻轻平铺在40~45℃的水面上，借水的张力和水的温度，将略皱的蜡带自然展平。
(8)贴片、烘片:待切片在恒温水面上充分展平后，将蜡片捞到载玻片的中段处倾去载玻片上的余水，置入60~65℃恒温箱内或切片漂烘温控仪的烘箱内烤片15~30分钟，脱去溶化组织间隙的石蜡。
如图为一套石蜡切片的实验装置：浸蜡包埋机、切片机、摊片机。
如图为石蜡切片的标准操作手法
- 如何提高组织切片水平？
1）病理仪器是必备条件：选择合适的切片机是实验的首要因素；
2）待切样品的质量是关键因素：样品质量取决于前期处理工作的准确无误，包括固定、脱水、包埋等；
3）型号的匹配：合适的钢刀或一次性刀片;切片时需认真考虑样品类型、大小、厚度，兼顾操作者的便利性和舒适性；
4）操作者丰富的经验必不可少：操作者必须懂得切片机的工作原理，对机器进行精细调节以达最佳效果;能应对常见故障，消除一些潜在的影响因素；
5）常见故障的排除：如切片机刀片的角度，包埋块的温度和硬度，刀片上是否有缺口或杂质附着等。
本期主要讲的是组织切片的知识，时间有限，小编又得跟大家说再见了。下期同一时间，还有病理实验的操作小技巧与大家见面。欢迎大家留言与提问。
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