心心念念的周四又来了,不久前亚科因的组织了一场如火如荼的免疫病理实验学习,激起了不少好奇宝宝们的学习兴趣。大家纷纷留言,病理实验里面还有免疫组化、病理检测等方面的内容,还有很多病理知识没有给大家展现出来。看到大家留下的问题,小编在后续将会在亚科因微信平台,一一为大家揭晓。在这一期,小编将会从浅入深,从组织切片的知识开始为大家展开。
说到组织切片,大家就会有许多疑问了,下面就对大家的疑问进行逐一解析:
- 什么是组织切片呢?
切片(qie pian)玻片标本的一种。供光学显微镜或电子显微镜观察的动植物组织薄片。因要求不同,可用刀片进行徒手切片,也可将组织块包埋于石蜡或火棉胶中或以低温冰冻,用切片机切片。切成5~10微米薄片,供光学显微镜观察。用环氧树脂或甲基丙烯酸包埋组织块切制的超薄切片,其厚度在20~50纳米,专供在电子显微镜下观察。一般教学用的如根尖、茎的切片通称石蜡切片。
- 组织切片的实验步骤包括哪些环节呢?
- 组织切片的组织标本的初始形态是什么样子?
组织块的大小:所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm,以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部,但根据制片材料和目的不同,组织块的较理想体积也不同,如制作病理外检、科研切片,其组织块可以薄取0.1~0.2cm即可,这样可以缩短固定脱水透明的时间,若制作教学切片厚取0.3 ~0.5cm,这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
- 如何进行组织脱水透明?
标本经过固定和冲洗后,组织中含有较多的水分,必须将组织块内的水分置换出来,这一过程叫做脱水。无论是用石蜡切片,还是用火棉胶切片,都必须除去组织中所含水分,因含水组织与石蜡、火棉胶等包埋材料不相容,常用的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇。
脱水的步骤是:80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时,此过程可用脱水机自控完成。
丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂,但因其脱水能力很强,对组织有剧烈收缩作用,在制作科研、教学切片时一般不用该试剂。因乙醇、丙酮等不溶于石蜡,还要经过一个能溶于石蜡的溶剂替代过程称为透明。常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、水杨酸甲酯等。
- 如何进行浸蜡、包埋、切片、贴片?
(1)修整蜡块:可视其组织的大小,在组织边缘约0.1~0.2cm处,切去余蜡部分,否则易造成组织皱缩不平。
(2)准备好切片用具:切片刀、毛笔、眼科镊子(弯)、漂烘温控仪
(3)安装蜡块:将修好的蜡块安装在金属或木制持蜡器上。
(4)安装切片刀:将切片刀安装在切片机的刀台上,把刀台上的紧固螺丝旋紧,使切片时不产生振动,能保持一定的切片厚度。
(5)切片的厚度:切片机的厚度调节器上刻有0~50μm或0~25μm,可任意选择其厚度,石蜡切片的厚度一般在4~6μm。
(6)切片
(7)铺片:用眼科镊子镊起蜡带轻轻平铺在40~45℃的水面上,借水的张力和水的温度,将略皱的蜡带自然展平。
(8)贴片、烘片:待切片在恒温水面上充分展平后,将蜡片捞到载玻片的中段处倾去载玻片上的余水,置入60~65℃恒温箱内或切片漂烘温控仪的烘箱内烤片15~30分钟,脱去溶化组织间隙的石蜡。
如图为一套石蜡切片的实验装置:浸蜡包埋机、切片机、摊片机。
如图为石蜡切片的标准操作手法
- 如何提高组织切片水平?
1)病理仪器是必备条件:选择合适的切片机是实验的首要因素;
2)待切样品的质量是关键因素:样品质量取决于前期处理工作的准确无误,包括固定、脱水、包埋等;
3)型号的匹配:合适的钢刀或一次性刀片;切片时需认真考虑样品类型、大小、厚度,兼顾操作者的便利性和舒适性;
4)操作者丰富的经验必不可少:操作者必须懂得切片机的工作原理,对机器进行精细调节以达最佳效果;能应对常见故障,消除一些潜在的影响因素;
5)常见故障的排除:如切片机刀片的角度,包埋块的温度和硬度,刀片上是否有缺口或杂质附着等。
本期主要讲的是组织切片的知识,时间有限,小编又得跟大家说再见了。下期同一时间,还有病理实验的操作小技巧与大家见面。欢迎大家留言与提问。
欢迎广大“因粉”多多关注,还会有很大科研惊喜等着大家哟。同时,Abbkine的技术专家为了给广大读者提供学习生物知识的平台,经过不懈努力,将多种高端生物实验的干货整理出来,后期陆续在微信公众号中刊登,请广大热爱科学的读者持续关注Abbkine公众号(Abbkine)。
Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品,从免疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户最喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!
