血浆/血清cf-RNA分离方案：血浆/血清RNA提取纯化试剂盒

【前情回顾】：

【1】如何收集和保存血液样本中cf-DNA和cf-RNA，点击了解

【2】如何从血液中提取DNA，点击了解

【3】如何从血清、血浆中提取外泌体，点击了解

【4】如何提取血液样本外泌体中的RNA，点击了解

【5】如何分离血浆、血清中的外泌体，并提取外泌体中的RNA，点击了解

【6】如何从血浆、血清样本中分离出游离DNA（cf-DNA），点击了解

 

 

血浆/血清游离RNA或外泌体RNA是某些癌症和疾病的潜在生物标志物。外泌体是40 - 150nm的膜泡，由大多数细胞类型分泌。外泌体存在于唾液、血液、尿液、羊水和恶性腹水以及其他生物液体中。外泌体可能在介导感染因子和肿瘤的适应性免疫反应、组织修复、神经连接和病原蛋白的转移方面发挥功能作用。由于外泌体中包裹的RNA分子受到保护而不被RNA酶降解，因此可以从体液（如血浆或血清）中有效地回收。

 

如何从收集与保存的血浆和血清样本中分离出RNA（cf-RNA）呢？艾美捷科技作为专业的生命科学领域解决方案供应商，为您推荐Norgen Biotek品牌的血浆/血清RNA提取纯化试剂盒。

 

 

血浆/血清RNA提取纯化试剂盒的特色与优势：

 

1. 分离所有大小的游离和外泌体RNA，包括microRNA；
2. 多种血浆和血清输入量（50µL-5mL）;
3. 没有苯酚提取物；
4. 没有载体RNA；
5. 结合并洗脱所有RNA，无论大小或GC含量如何，无偏差
6. 将游离的RNA和外泌体RNA浓缩至灵活的洗脱体积；
7. 短时间内纯化高质量的RNA。
8. 纯化的血浆/血清RNA可用于很多下游应用，包括PCR，qPCR，甲基化敏感的逆转录qPCR，逆转录PCR，RNA印迹，RNA酶保护和引物延伸，表达阵列测定和NGS。

 

血浆/血清RNA纯化小提试剂盒（货号55000），厂家测试结果：

 

从不同体积的血浆中纯化cf-RNA。该血浆由EDTA收集的血液中制备而来。然后将3ul纯化的RNA用作RT-qPCR反应中的模板，以检测miR-21（图A）和5S rRNA转录物（图B）。miR-21和5S rRNA转录物的相对含量随着样上样量的增加而线性增加。

 

 

将纯化的cf-RNA洗脱至不同的体积。然后将3ul纯化的RNA用作RT-qPCR反应中的模板，以检测miR-21。随着洗脱体积的增加，miR-21的相对量增加，表明在非常低的洗脱体积中血浆cf-RNA仍然有比较好的有效浓度。

 

 

【血浆/血清RNA纯化小提试剂盒（货号55000）-各品牌横向对比】

 

血浆中miRNA有效性和一致性检测。Norgen试剂盒与竞争对手Q、A、E试剂盒从血浆中分离miRNA。使用miR-21特异的引物进行茎环RT-qPCR。与其他分离方法相比，Norgen的试剂盒是唯一能够显示miR-21转录本高一致性和回收率的产品。使用Norgen试剂盒从200μL血浆中回收miRNA高于使用竞争对手A试剂盒从600μL纯化的RNA中回收的miRNA。

 

 

血浆/血清RNA纯化中提试剂盒（货号56100），厂家测试结果：

 

从不同体积的血浆中纯化cf-RNA。该血浆由柠檬酸盐作为抗凝剂收集的血液中制备而来。然后将2ul纯化的RNA用作RT-qPCR反应中的模板，以评估5S rRNA转录物的扩增。随着上样量的增加，5S rRNA转录物的平均Ct值线性降低。

 

 

从不同体积的血浆中纯化cf-RNA。该血浆由柠檬酸盐作为抗凝剂收集的血液中制备而来。然后将2ul纯化的RNA用作RT-qPCR反应中的模板，以评估来自不同血浆体积的5S rRNA转录物（A）和miR-21（B）的线性关系。Norgen的血浆/血清RNA纯化中提试剂盒能够从0.75 mL血浆中回收97％的5S rRNA转录物和miR-21转录物。此外，从1.5mL血浆中回收95％的5S rRNA转录物和miR-21。

 

 

检测人5S rRNA转录物时在血浆RNA样品中存在的抑制剂含量检测。使用Norgen试剂盒从不同体积血浆中分离cf-RNA。在20μL的逆转录qPCR反应中使用不同的洗脱体积，以观察Ct值的变化。随着PCR上样量的增加，Ct值趋于降低，表明使用Norgen试剂盒从血浆中纯化的cf-RNA不含血浆中的常见抑制剂。

 

 

血浆/血清RNA纯化大提试剂盒（货号56200），厂家测试结果：

 

从不同体积的血浆中纯化cf-RNA。该血浆由柠檬酸盐作为抗凝剂收集的血液中制备而来。然后将2ul纯化的RNA用作RT-qPCR反应中的模板，以评估来自不同血浆体积的5S rRNA转录物（A）和miR-21（B）的线性关系。Norgen的血浆/血清RNA纯化大提试剂盒能够从3mL血浆中回收92％的5S rRNA转录物和91％的miR-21。此外，从5mL血浆中回收90％的5S rRNA转录物和90％的miR-21。

 

 

检测人5S rRNA转录物时在血浆RNA样品中存在的抑制剂含量检测。使用Norgen试剂盒从不同体积血浆中分离cf-RNA。在20μL的逆转录qPCR反应中使用不同的洗脱体积，以观察Ct值的变化。随着PCR上样量的增加，Ct值趋于降低，表明使用Norgen试剂盒从血浆中纯化的cf-RNA不含血浆中的常见抑制剂。

 

 

已发表文章参考：

 

1. MicroRNA molecular profiling from matched tumor and bio-fluids in bladder cancer.Molecular Cancer. 2015.
2. Serum microRNA-34a is potential biomarker for inflammation in nonalcoholic fatty liver disease.Asian Biomedicine. 2016.
3. Circulating MicroRNAs: Association with Lung Function in Asthma.PLOS ONE. 2016.
4. Circulating nucleic acids damage DNA of healthy cells by integrating into their genomes.Journal of Biosciences. 2015.

 

Norgen Biotek成立于1998年，公司总部位于加拿大，是一家著名全球化生物技术公司，生产基于专利技术的核酸和蛋白质纯化及富集产品用于研究和诊断。Norgen Biotek 在2003年获得加拿大国家研究委员会颁发的科技创新奖，是一家致力于样品制备并获得ISO 9001（产品质量）、ISO 13485（产品可用于商业化的医疗设备，包括用于体外诊断领域）和ISO 15189（可用于临床检测机分子诊断领域的研发能力）认证的生物科技公司。目前该公司的产品多达700余种，提供一流的样品制备试剂盒，应用于基因组和蛋白组等不同的领域。