PicoGreen升级版——Pico488:荧光法双链DNA定量解决方案

前情回顾:核酸定量哪家强?荧光探针VS分光光度法

 

在许多生物学应用中,我们都需要对微量的双链DNA(dsDNA)进行定量 例如:cDNA文库构建、亚克隆的DNA片段的纯化、定量DNA扩增产物在药物分子种的残留等。常规检测核酸浓度的方法是吸光度法,即检测核酸在260nm ( A260 )处的光吸收,吸光度法的弊端是样本中的单链核苷酸和单体核苷酸会产生干扰信号,样品中的杂质也会影响结果。吸光法无法区分DNA和RNA, 灵敏度也相对较低(用1cm的比色杯在A260值为0.1时相对应的双链DNA浓度为5ug/ml )。

 

今天给大家带来一款荧光法双链DNA检测工具—Pico488 dsDNA 定量试剂盒(货号:B1102),Pico488是一种极为灵敏的荧光核酸染料,常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建,DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义,疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。

 

Pico488仅在与DNA双链结合后才发出荧光,且所产生的荧光与DNA浓度呈正比,在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下,可以选择性地检测低至pg级别的dsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性,且几乎无序列依赖性,可以精确地测量多个来源的DNA,包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物,可用荧光分光光度计或荧光酶标仪读数,Ex/Em=503nm/525nm。

 

Pico488 dsDNA 定量试剂盒

产品优势:

相比传统的方法,如紫外吸光法(A260)、探针杂交法、Hoechst 33258染料法等,Pico488 dsDNA 定量具有以下优势:

①灵敏度高:数量级较UV吸光读数更敏感,检测范围为:1pg/ul–5ng/ul,可节省宝贵的样品;

②特异性强:在等摩尔的RNA存在的条件下,对dsDNA具有特异性;

③耐受性好:耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖,可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA;

④易于使用:只需在样品中加入染料,等待5分钟,然后读数即可,且适用于24和96孔板;与市面上的大多数荧光酶标仪和荧光计兼容;

⑤适用范围广:可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。

 

产品应用:

测定微量的DNA残留(如疫苗生产);对DNA样品进行精确定量

 

适用检测设备及建议上样量:

检测设备类型 测定体积 Pico488染料工作液体积 DNA样本量
比色皿荧光计 标准荧光比色皿 (3.5 mL) 2 ml 1 ml 1 ml
其他荧光比色皿 比色皿体积75% 比色皿体积的37.5% 比色皿体积的37.5%
平板荧光计 96 孔板*,每孔 0.2 ml 0.1 ml 0.1 ml
24 孔板,每孔 1 ml 0.5 ml 0.5 ml
其他规格的板子 孔体积的75% 孔体积的75% 孔体积的75%
NanoDrop™ 3300* 0.1 ml 0.05 ml 0.05 ml

* 为了保持测量的准确性和精度,我们建议避免移液体积小于2ul。

 

检测结果展示:

Pico488光谱信息
Pico488光谱信息
Pico488染料特异性针对于dsDNA
Pico488染料特异性针对于dsDNA
试剂盒标准曲线
试剂盒标准曲线

 

引用文献赏析

1.Caza, F.; Granger Joly de Boissel, P.; Villemur, R.; Betoulle, S.; St-Pierre, Y. Liquid biopsies for omics-based analysis in sentinel mussels. PLoS One2019, 14(10), e0223525. doi: 10.1371/journal.pone.0223525

2。Crupi, A.N.; Nunnelee, J.S.; Taylor, D.J.; Thomas, A.; Vit, J.-P.; Riera, C.E.; Gottlieb, R.A.; Goodridge, H.S. Oxidative muscles have better mitochondrial homeostasis than glycolytic muscles throughout life and maintain mitochondrial function during aging. Aging2018, 10(11), 3327–3352. doi: 10.18632/aging.101643

 

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文章来源:荧光法双链DNA定量工具—Pico488(PicoGreen升级版)

 

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