ORF克隆和cDNA 克隆区别

 

最近天气炎热,在实验室的童孩估计有点冒火,本来在这夏困秋乏的季节,每天都昏昏欲睡,还没个假期(这也没办法,疫情嘛),还要一天天围着实验转,做的出来还好,做不出来头大心塞啊。尤其是新进实验室的小白,对于实验的方方面面更是一头雾水,面对导师的“期待与厚望”,怀着一腔热血,踌躇满志,踏上了科研的不归路。话虽如此,该不懂的还是不懂:

 

基因克隆

比如说,老师给了你整个宇宙那么大的范围,让你选择自己的研究课题,该怎么选课题呢?又比如说导师给了你一个基因,让你去研究它,要怎么去研究呢?又比如说,导师给了你一个基因,还告诉了你怎么去研究,首先第一步是去把这个基团给克隆一下吧。

 

基因克隆

 

听到这里,你第一反应可能是:啥?把这个基因克隆一下?什么意思?小朋友你是不是有很多问号?不过没关系,不懂就问后还是不懂就查资料看文章看文献嘛,总有解决问题的办法。

 

小编不才,今天就给实验小白们捋捋ORF克隆和cDNA 克隆方面的知识吧。

 

一 、相关概念

 

关于基因克隆,刚刚踏入实验室的童孩们可能会比较陌生,不知道何为基因克隆,我们之前只是学过动物克隆呀。比如说克隆羊多莉,大部分理科生应该是有点印象的吧。由克隆羊多莉引出了克隆的概念:

 

克隆 (Clone):是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖,以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。通常是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因的个体或种群。多莉就是一个“copy”出来的动物,与供核的羊妈妈长得一模一样,基因型也是一模一样的。因此我们又引出来了概念:基因克隆。

 

克隆

 

基因克隆:也叫分子克隆,是在体外对DNA分子按照既定的目的和方案进行人工重组,将重组分子导入到合适的受体细胞中,使其在细胞中扩增和繁殖,以获得DNA分子大量复制,并使受体细胞获得新的遗传特征的过程。

 

举个例子来说,A基因是调控小鼠褪黑素的分泌的,我想要完全抑制小鼠褪黑素的分泌,观察褪黑素分泌抑制后小鼠的身体状况。我们就需要在体外重组这个A基因(使A基因能够抑制褪黑素分泌),并进行大量的复制,然后将复制好的重组的A基因连接到相应的表达载体上,然后再将这个载体转入受体细胞中或者小鼠内,若实验成功的话,小鼠的褪黑素会被完全抑制分泌,褪黑素被完全抑制了的小鼠,身体状况可能会出现相应的问题。

 

而拿着一个基因要怎么去分析,去克隆自己想要的片段,就需要根据自己的实验需求来进行了。小编今天就给大家讲讲ORF克隆和cDNA 克隆。

 

cDNA 克隆:是全长转录本的cDNA克隆,既包含了全长蛋白质的编码序列,也包含 5' 和 3' UTR非编码序列,不能直接用于转染细胞表达,需要把5’ 及3’ UTR截去然后将表达框连接到构建好的表达载体才可以进行转染细胞并表达。

 

ORF克隆:一个全长ORF(开放阅读框)克隆,是指一个插入有编码全长蛋白质DNA 片断的质粒。该插入DNA 片断只含有编码一个全长蛋白质的序列(从起始密码到终止密码),而不包含有5′或3′端的非翻译区(UTRs)或内含子。

 

怎么?概念不好理解?没事,看下面的图:ORF就是基因的开放阅读框,没有5' 和3' UTR序列。是不是感觉很简单呢?

 

ORF克隆

 

cDNA 克隆最主要的用途就是大量复制,并保存单一cDNA信息,构建cDNA文库,亚克隆等。也由于其5’UTR非编码区容易形成复杂的二级结构,在蛋白质翻译时容易出现问题。因此,cDNA克隆载体必须去掉5' 和3' UTR序列后,再连接到对应的表达载体中才能够在受体细胞中进行表达。

 

而ORF克隆就没有那么复杂了,它是cDNA开放阅读框区域的序列,无5' 和3' UTR序列,可直接在宿主细胞中进行表达,更为省时省力。所以大家在选择哪一种克隆的时候,要想好自己要做什么实验,以及所要考虑的因素比如价格,时间,操作等。

 

二、 相关产品  

 

看到这里,相信大家对cDNA克隆和ORF克隆有了一定的了解,那接下来就来聊聊相关的产品吧!

 

1.全长cDNA克隆产品

cDNA克隆(长度是指编码区) FL / MFL开头的cDNA克隆现在基本不销售,主卖表达克隆
0-1000bp  cDNA克隆 小鼠 质粒10μg,及产品说明。不提供菌种和实验数据。
1000-2000bp  cDNA克隆 小鼠
2000bp-4000bp cDNA克隆 小鼠
4000bp以上 cDNA克隆 小鼠
0-1000bp  cDNA克隆
1000-2000bp  cDNA克隆
2000bp-4000bp cDNA克隆
4000bp以上 cDNA克隆
部分特殊基因不在促销范围之内 人、小鼠
在线客服 在线客服雷雷 在线客服闪闪

 

先要购买的童孩可以根据自己的物种,转录本、载体等在Genecopoeia官网上搜索哟~~如果是要定制产品,也可以联系武汉艾美捷公司进行咨询哦。

 

2.ORF克隆相关产品

 

1】即用型ORF克隆套装

货号 基因数 克隆数 载体 产品描述
OC-HG-M02 12841 16,096 Receiver-M02 Non-viral Human whole genome mammalian expression clone sets (no tag)
OC-HG-M13 12,579 13,766 pReceiver-M13 Non-viral Human whole genome mammalian expression clone sets (with C-terminal Flag tag)
OC-HG-Lv105 12,651 15,799 pReceiver-Lv105 Lentiviral Human whole genome lentiviral expression clone sets (with no tag)
OC-HG-GC 14,087 18,660 pDONR™ Vector Gateway® Human whole genome Gateway® PLUS™ shuttle clone sets (no promoter)

 

当然,这只是一小部分产品,即用型的ORF克隆载体也是厂家极力推荐的省时省力的产品哦,这类产品一共有7种克隆载体供您选择若是想要查询更多的产品,可以根据自己的物种,转录本、载体等在Genecopoeia官网上搜索哟~~如果是要定制产品,也可以联系武汉艾美捷公司进行咨询哦。

 

全方位的表达载体选择

表达载体 种类
ORFEXPRESS™ Gateway® PLUS 1种
大肠杆菌表达克隆载体 15种
哺乳细胞表达克隆载体 48种
慢病毒表达克隆载体 82种
酵母表达克隆载体 3种
麦胚无细胞表达克隆载体 8种
昆虫细胞表达克隆载体 1种

 

【2】ORFeome

 

GeneCopoeia提供20,000人的ORFeome collaboration克隆,这些构建到Gateway® Entry载体的克隆缺少多克隆位点。客户可以选择载体是否需要终止密码子。公司还提供小家鼠的ORFeome克隆。

 

【3】人类 及小鼠 Safe Harbor ORF 敲入克隆

货号 产品 产品描述
SH300 人类 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克隆(DC-C9NU-03 ORF区为 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 启动子启动表达。能将Cas9 核酸酶基因整合到人类 AAVS1 safe harbor 位点。 (Puromycin)
SH301 人类 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克隆(DC-C9NU-04 ORF区为 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 启动子启动表达。能将Cas9 核酸酶基因整合到人类 AAVS1 safe harbor 位点。 (Hygromycin)
SH302 人类 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克隆(DC-C9NU-05 ORF区为 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 启动子启动表达。能将Cas9 核酸酶基因整合到人类 AAVS1 safe harbor 位点。 (Neomycin)
SH350 小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克隆(DC-C9NU-06 ORF区为 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 启动子启动表达。能将Cas9 核酸酶基因整合到人类 小鼠 ROSA26 位点。(Puromycin)
SH351 小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克隆(DC-C9NU-07 ORF区为 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 启动子启动表达。能将Cas9 核酸酶基因整合到人类 小鼠 ROSA26 位点。 (Hygromycin)
SH352 小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克隆(DC-C9NU-08 ORF区为 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 启动子启动表达。能将Cas9 核酸酶基因整合到人类 小鼠 ROSA26 位点。 (Neomycin)
多种 人类 AAVS1 或小鼠 ROSA26 ORF 敲入克隆 由 CMV 启动子启动 ORF 表达。能将 ORF 或您的目的基因敲入人类 AAVS1 或小鼠 ROSA26 safe harbor 位点。

 

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