如何计数分泌小鼠IgG的B细胞？小鼠IgG的ELISpot试剂盒

 

IgG（免疫球蛋白G）是血清中最丰富的Ig同种型，占所有血清免疫球蛋白的约80％。在人类中，存在四种IgG亚类，其具有最高的IgG1血清浓度，接着是IgG2，IgG3和IgG4。在小鼠中，IgG亚类定义为IgG1，IgG2a/c，IgG2b和IgG3。IgG分子由两条重链和两条轻链组成，用于特异性的结合抗原。在对抗原的典型免疫应答中，在初始IgM应答后能诱导高水平的IgG抗体。

 

 

 

ELISpot特点：

 

酶联免疫斑点实验（Enzyme-Linked Immunospot Assay，ELISpot）是一种高灵敏度的在单细胞水平检测细胞因子或免疫球蛋白分泌的免疫学检测手段。现在被大量应用于特异性免疫感染的调查、癌症、过敏，自身免疫性疾病和疫苗开发等领域。ELISpot检测具有相当高的灵敏度，即当一百万个阴性细胞中有一个阳性细胞，ELISpot也可检测到该阳性细胞。

 

ELISpot原理：

 

将细胞置于包被有特异性抗体的96孔板中培养，在有刺激的条件下，细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被抗体捕获。移除细胞后，被捕获的细胞因子可进一步使用生物素标记的一抗来标识，其后再与酶标记的亲和素作用，并加入底物使其呈色，有反应作用的细胞会留下直径大小不等的染色斑点。

 

 

如何计数分泌小鼠IgG的B细胞？艾美捷科技作为专业的生命科学领域解决方案供应商，为您推荐Mabtech品牌的ELISpot相关试剂盒，产品优质，发表多篇高分文章。

 

 

特点和优势：

 

1. 计数分泌小鼠IgG以及抗原特异性小鼠IgG的B细胞。
2. 试剂盒含有捕获抗体，检测抗体，链霉亲和素-ALP（HRP）和多克隆激活剂。
3. 适用于想要设置和优化实验的客户。
4. 高度敏感，稳定且易于标准化。

 

Tips：

 

抗原特异性B细胞有两种可供选择的方式计数：在检测步骤中通过用抗原包被或通过使用生物素化的抗原。对于记忆B细胞，我们建议用R848和重组小鼠IL-2（均包括在内）进行预刺激。

 

如下图，（A）抗原或（B）特异性抗免疫球蛋白的抗体与板结合。然后，通过（A）生物素化的抗IgG或（B）生物素化的抗原检测抗原特异性抗体。后一种方法产生更明显的斑点，并且还减少了所需抗原的量。（C）是ELISpot测定以确定总的IgG。

 

 

厂家测试结果：

 

货号3825-2A，试剂盒含链霉亲和素-ALP，厂家测试结果：

 

在不存在或存在R848和重组IL-2的情况下，将小鼠脾细胞预孵72小时。然后洗涤细胞，加入ELISpot孔中并分析总IgG的分泌（100,000个细胞/孔，过夜孵育）。

 

 

精彩文章鉴赏：

 

Antigens reversibly conjugated to a polymeric glyco-adjuvant induce protective humoral and cellular immunity. Nature Materials. 2019.

 

 

已发表文章参考：

 

1. B cells promote insulin resistance through modulation of T cells and production of pathogenic IgG antibodies.Nature Medicine.2011.
2. Autoreactive, Low-Affinity T Cells Preferentially Drive Differentiation of Short-Lived Memory B Cells at the Expense of Germinal Center Maintenance.Cell reports.2018.
3. Nucleic Acid-Targeting Pathways Promote Inflammation in Obesity-Related Insulin Resistance.Cell reports.2016.
4. Immunological responses following administration of a genotype 1a/1b/2/3a quadrivalent HCV VLP vaccine.Sci Rep.2018.
5. Oxidation-sensitive polymersomes as vaccine nanocarriers enhance humoral responses against Lassa virus envelope glycoprotein.Virology.2017.

 

Mabtech公司于1986年创办于瑞典，是一家欧洲的集研究，开发，销售，技术支持为一体的高科技免疫生物技术公司。Mabtech公司始终专业致力于研发新的单克隆抗体，生产创新的免疫试剂和销售高品质的全配套的免疫试剂盒。公司核心业务是致力于优化发展酶联免疫斑点法技术 (ELISpot)、荧光免疫斑点法技术 (FluoroSpot) 和酶联免疫吸附试验技术 (ELISA) 等免疫学方法。公司开发和生产多种针对细胞因子，免疫球蛋白和载脂蛋白的单克隆抗体，用于生命科学研究中的体外应用。Mabtech的试剂盒可用于研究感染性疾病，癌症，过敏，移植等免疫反应，通常用作疫苗试验中的监测工具。此外，还生产用于兽医和心血管研究的试剂盒。

 

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