线粒体分离试剂盒和手提实验步骤，你要的都在这里

摘要

手提线粒体的详细流程以及线粒体分离试剂盒推荐，以正确的姿势分离提取线粒体，节日真福利，戳进来…

上周说过，会抽空把用到的线粒体分离试剂盒和手提线粒体的流程给大伙儿整理一下，小编这里也是如约而至啦。以下是手提线粒体的详细流程以及线粒体分离试剂盒推荐，欢迎大家抽空验证。

mitochondria-structure

线粒体分离Buffer (Isolation Buffer, IB)配制:

蔗糖：320 mM EDTA：1mM HEPES：10 mM pH 7.2

Buffer放置于4℃，如果Buffer过酸需要调节pH，需用KOH调节，避免用NaOH。临用时向10 mL Isolation Buffer中加入一片罗氏蛋白酶抑制剂cocktail，于冰上预冷。所有提取步骤均在低温下进行（建议保持在4℃）。在开始提取前，先将离心机预冷。

以10⁷个细胞为例（10 cm培养皿），提取步骤如下：

1、取3 mL预冷IB洗涤细胞；

2、每个10 cm培养皿中加入1 mL预冷IB，将细胞刮下；

3、将细胞转移到15 mL离心管中，总体积约 2 mL；

4、在预冷的4℃离心机上，以700 g转速离心5 min；

5、弃上清，加2 mL PI重悬细胞；

6、高压破碎细胞（冰上2,000psi处理10min）;

7、用1 mL移液器将破碎的细胞产物转移到离心管中，在预冷的4℃离心机上，以700 g转速离心8 min

8、小心移出上清到新的离心，标记为S1，冰上放置；

9、取500 uL PI重悬步骤7后的沉淀，在预冷的4℃离心机上，以700 g转速离心5 min；

10、小心移出上清，与S1混合，总体积约3 mL；

11、在预冷的4℃离心机上，以17,000 g转速离心11 min；

12、小心移出上清，上清部分为胞质蛋白，沉淀部分为线粒体；

13、小心吸取百色沉淀到新的离心管，加入50 uL IB重悬；

14、提取好的线粒体于-80℃保存，可取适当线粒体裂解后用BCA法检测蛋白浓度。

至此，线粒体提取完毕，若在浓度检测后达到呼吸链复合体检测要求，就可以用线粒体试剂盒检测啦。当然，要是觉得手提不方便，浓度难以保证，没关系，我们是有线粒体提取试剂盒提供的，就看各位偏好啦。

产品名称	货号	详情
MitoCheck Mitochondrial (Tissue) Isolation Kit	701010-1	详情
Mitochondria/Cytosol Fractionation Kit	K256-100	详情

更多的详情知识：

jieweitu