干货分享-酶标仪的操作方法和使用注意事项

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酶标仪，也被称为酶联免疫检测仪，是在生物化学、分子生物学和细胞生物学等基础研究领域中常用的一种微孔板检测器，用于测量经处理过的样品（包括细胞、蛋白质、核酸、细胞上清中的炎症因子等）的吸光值。根据功能的不同，酶标仪可以分为光吸收酶标仪（包括可见光酶标仪和紫外/可见光酶标仪）、荧光酶标仪、化学发光酶标仪以及多功能酶标仪。

今天我们以Perkinelmer multimode plate reader为例，将介绍多功能酶标仪的基本操作方法和使用注意事项，该仪器集多种功能于一身。

一、仪器介绍

多功能酶标仪具有光吸收、荧光、化学发光等检测模式；另外还具备温控、样品震荡等功能。实验室测量载体一般为96孔板（酶标板），测试液的最终体积不超过300μL。

二、操作步骤

1、开机准备：打开仪器电源包括酶标仪和电脑主机并等待仪器自检完成。

2、软件操作

（1）打开与仪器配套的软件，建立新的检测程序或打开已有程序。

图1酶标仪打开界面

（2）具体操作：包括设定具体程序和在已创建程序中修改参数。酶标仪程序设置依次包括：①Run protocols; ②Create Protocols;③Edit Protocols; ④Show Results。

图2 酶标仪程序设置

1）创建新程序：点击【Create Protocols】，选择所需要创建的的程序协议：①Absorbance（吸光值）②Luminescence（化学发光）③Fluorescence Intensity（荧光强度）。选定试验协议→波长选定→酶标板选定→设置protocol参数。进行参数设置时，我们可以选定酶标板震荡混匀样品的时间、测量样品的结果的时间，选定样品波长扫描范围以及样品环境温度等，其中波长扫描对样品进行全光谱扫描，从而获得样品在不同波长下的吸光度变化，这对于研究样品的光谱特性非常有用。

图3选择创建程序协议

图4 波长选定

实验室常用protocol、协议和波长选定

Protocol	测量波长/nm	酶标板
BCA	562	96
MTT	490/492	96
CCK-8	450	96
ELISA	450	96
酶活检测	340	/
菌液生长曲线	600	96
生物素标记	414	96
荧光素酶活性	/	黑/白96

注意：常用测定波长检测范围在400～750nm或800nm之间

图5 选定酶标板

图6 protocol参数设置

2）修改已有程序：在酶标仪打开界面中选定一个protocol,然后双击【Edit Protocols】，进入程序设置界面依次包括Plate、Measurement、Calculations、Settings、Output。酶标板设置：点击鼠标右键移动清除选定酶标孔，点击鼠标左键移动鼠标选定需要的酶标孔。设置Measuremen可更改酶标板震荡时间，测定波长等与创建新程序参数设置一致。而Calculations、Settings、Output等设置一般选择仪器默认。