核酸酶,微球菌,Worthington核心酶方案

微球菌核酸酶催化DNA和RNA的切割,产生3'-核苷酸。它表现出外切和内切-5'-磷酸二酯酶活性。该酶在富含腺苷酸或尿苷酸和脱氧腺苷酸或胸苷酸的位点催化RNA和DNA的优先内水解。该酶的分子量为16,807道尔顿,并且依赖于钙。最佳pH值为9.2,但根据存在的离子钙浓度而变化。

 

作为Worthington全国总代理,艾美捷科技强烈推荐Worthington主要产品核酸酶,微球菌产品仅用于科研,不可用于临床诊断。

 

产品名称 货号 详情
核酸酶,微球菌
Nuclease, Micrococcal
WBC-LS004798 查看

 

稳定性/存储:为了在溶液中长期储存长达六个月,将NUCSI稀释至≥6000 u / ml在水中并等分冷冻。稀释溶液可以通过添加0.1%白蛋白(Worthington代码:BSANF)和10%甘油来稳定。

 

测定方案:

方法

基本上是海因斯等人所描述的。(1966)基于核酸酶消化DNA后酸溶性寡核苷酸的释放。一个单位对应于在指定条件下,在 1°C 和 pH 0.260 下,在 37 nm 处光密度的变化为 8.0。

以一毫克/毫升的速度溶解在试剂级水中。在0.001%白蛋白中稀释至0.002-0.1mg / ml。

程序

移液器放入 5 个编号的试管中的每一个,如下所示:

0.1 M 硼酸钠,pH 8.8 0.1毫升
0.01 米氯化钙2 0.05毫升
0.25% 脱氧核糖核酸 0.1毫升

在 37°C 水浴中孵育 6-7 分钟以达到温度平衡。准备至少四种不同的酶稀释液,范围为0.001-0.0002 mg / ml。每隔一段时间,将0.1ml适当稀释液移液到相应的管中,并在水浴中更换。在第五个,作为空白,加入0.1毫升0.1%白蛋白。孵育 30 分钟。通过加入0.5ml 7%高氯酸以定时间隔停止反应。将试管放入冰浴中10分钟,然后加入2.7毫升试剂级水。在临床离心机上以最高速度离心15分钟。提取清除上清液并读取A260与空白。

注意:为获得最佳结果,应稀释样品,以便最终 A260介于0.2-0.9之间。

试剂

0.1 M 硼酸钠,pH 8.8

0.01 M 氯化钙

DNA,2.5毫克/毫升:通过将25毫克沃辛顿小牛胸腺DNA溶解在10毫升0.01米纳米氯化中制备。在室温下静置过夜,然后慢慢搅拌以达到溶液效果。

7%高氯酸

0.1%牛血清白蛋白

 

核酸酶,微球菌相关产品:

无核酸酶白蛋白 脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF) 组蛋白 (H, NHL) 溶菌酶 (LY/LYSF) 核酸酶,S1 (中新/中核酸) 核酸、DNA、大肠杆菌、λ/片段、RNA磷酸酶,碱性 磷酸酶 (CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC)磷酸二酯酶 I (VPH) 磷酸二酯酶 II (SPH) 蛋白酶 K (PROK/PROKS) 逆转录酶,重组 HIV (RTHIV)核糖核酸酶 A (R/RAF/RASE/RS/RPDF)核糖核酸酶 T1,不含动物源性 (RT1S)

 

核酸酶,微球菌部分引用文献:

Alexander, M. , Heppel, L. and Hurwitz, J.

The Purification and Properties of Micrococcal Nuclease , J Biol Chem 236 , 3014 , 1961

Andria, G. , Taniuchi, H. and Cone, J.

The Specific Binding of Three Fragments of Staphyloccoccal Nuclease , J Biol Chem 246 , 7421 , 1971

Anfinsen, C. , Rumley, M. and Taniuchi, H.

Structural and Enzymatic Properties of the Extracellular Nuclease of Micrococcus pyrogenes , Acta Chem Scand 17 , 5270 , 1963

 

是Worthington的主要产品线。从技术上讲,Worthington实际上并不制造酶,而是从各种动植物组织和各种微生物来源(如细菌、真菌和霉菌)中提取酶。根据该酶在材料中的普遍性选择特定酶的起始材料。例如,一种功能涉及使肌肉工作的酶将主要存在于肌肉组织中,因此起始材料可能是兔肌肉或猪心;参与发酵的酶最好在酵母中找到。 Worthington使用的一些动物组织包括牛胰腺、猪肾、牛眼、马肝、兔肌肉、牛肝、猪心、马血和小牛肠。各种蛋白质也从辣根、红薯、杏仁和美洲商陆中提取。一些产品是从大肠杆菌、几种梭状芽胞杆菌和各种其它细菌中分离出来的。还使用酵母、蘑菇、全脂牛奶和鸡蛋等。

 

Worthington是一家通过的ISO9001认证的家族企业。主要生产用于生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。作为生命科学领域知名的酶类供应商,以及细胞分离酶的专家级公司,其核心酶产品包括:胶原蛋白酶,脱氧核糖核酸酶I,弹性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶,胰蛋白酶等。

 

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