“艾”学习丨液体活检之尿液系列

 

液体活检之尿液

 

 

1.在液体活检研究中,尿液为什么是“后起之秀”?

 

* 液体活检技术是体外诊断的一个创新技术。尿液是肾脏排出的代谢废物,可以反映出人体健康方面的诸多信息,比如红细胞异常、白细胞异常、尿蛋白异常等;

 

* 在泌尿肿瘤领域,由于大部分泌尿肿瘤生长于尿路中,而尿液则成了该肿瘤领域特殊的、可靠的、便于操作的液体活检的检测样本;

 

* 通过对尿液样本进行生物标志物的筛查,可针对肿瘤相关信息进行早期诊断以及预后监测;

 

* 相比血液检测它更加“无创”,同一个体可重复取样。

 

2.如何收集和保存尿液中DNA,RNA和蛋白质呢?

 

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特点和优势:1. RNA / microRNA / DNA / 蛋白质在室温下可保存2年以上;2. 可适用于大多数DNA,总RNA,microRNA和蛋白质分离方法;3. 抑制微生物的生长,从而实现低表达靶标的更高灵敏度的分离;4. 防腐剂使尿液无菌(非感染性),同时保持DNA,RNA,外泌体和蛋白质的完整性。

 

3.如何从收集与保存的尿液样本中分离出游离DNA(cf-DNA)呢?

 

游离DNA (Cell-Free Circulating DNA,cf-DNA)是一种在细胞外呈现游离状态的DNA,广泛存在于动植物及人类的血清、血浆、脑脊液、尿液、唾液或粪便中。cf-DNA已被证明是一种对众多疾病有用的生物标志物,包括创伤,败血症,无菌性炎症,心肌梗塞,中风,移植,糖尿病和镰状细胞病等。

 

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优势:1. 从新鲜,保存或冷冻的尿液样本中分离所有大小的游离DNA,不含抑制剂;2. 分离病毒DNA;3. 多种尿液输入量(250μL-30 mL);4. 游离DNA从50μL到100μL的灵活的洗脱体积;5. 短时间内纯化高质量的DNA;6. 与Norgen的尿液防腐剂和其他市售尿液防腐剂兼容。

 

4.如何从收集与保存的尿液样本中分离出游离RNA(cf-RNA)呢?

 

使用尿液核酸相比于血液,组织或其它体液样本的优点,包括:1. 尿液对HIV无感染性,对许多其它病原体的感染性较低; 2. 尿液核酸谱与血浆或血清相似,但浓度较低; 3. 由于蛋白质浓度低(比血液低1000倍),从尿液中纯化核酸在技术上更容易。

 

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优势:1. 分离所有大小的游离和外泌体RNA,包括microRNA;2. 多种尿液输入量(250μL-30 mL);3. 不含苯酚;4. 无载体RNA;5. 结合并洗脱所有RNA,无论大小或GC含量如何,无偏差;6. 灵活的洗脱体积(50μL-100μL);7. 短时间内纯化高质量的RNA。

 

5.如何从收集与保存的尿液样本中分离出microRNA呢?

 

microRNA通常是长20-25个核苷酸,并通过与mRNA分子结合并影响其稳定性或翻译来调节基因表达。已有研究表明,microRNA可调节细胞生长和凋亡。此外,临床和实验分析表明microRNA可以作为一类新的癌基因或肿瘤抑制基因起作用。不同肿瘤类型的microRNA表达谱,相对于其正常组织来说,可为特定癌症类型提供表型特征。异常microRNA表达的独特模式可以作为肿瘤诊断,疾病特异性结果预后和治疗反应预测的分子生物标志物。

 

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6.如何提取尿液样品中外泌体?

 

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特点和优势:1. 纯化和富集的完整尿液外泌体可用于功能研究;2. 样本输入量多样;3. 无需耗时的超速离心,过滤或特殊注射器;4. 无需沉淀试剂,也无需过夜培养;5. 无需蛋白酶处理;6. 适用于多种物种;7. 外泌体被纯化并且不含任何其它RNA结合蛋白;8. 可以使用NanoSight®或电子显微镜分析纯化的外泌体,以评估近似外泌体大小范围和浓度。

 

7.如何提取尿液外泌体中的RNA呢?

 

外泌体和其它细胞外囊泡中存在不同的microRNA亚群,这些亚群取决于分泌它们的肿瘤细胞类型。正因为如此,外泌体RNA可以作为包括癌症在内的各种疾病的生物标志物。

 

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