Norgen各种外泌体纯化试剂盒——快速、灵敏、特异

 

外泌体是位于体内的细胞外囊泡。特别是在液体活组织检查中,如血浆、脑脊液、唾液、尿液、母乳等。它们的大小通常为40-100nm,是体内最小的囊泡。

 

外泌体的结构:

  • 外泌体有一个含有表面蛋白的磷脂双分子层。这些蛋白质可以均匀地存在于所有的外泌体中,或者根据外泌体释放的位置而独特存在。这些表面蛋白有如:CD63,CD9,Alix。
  • 外泌体包含蛋白质、RNA和microRNA,偶尔也包含DNA。

 

外泌体的结构

 

外泌体的应用:外泌体在体内有特定的应用,但也可用于其他临床目的。它们可用于:

(1)免疫调节;

(2)组织再生;

(3)诊断;

(4)生物标记物发现;

(5)基因治疗。

 

外泌体的纯化:有多种方法可以纯化外泌体。这些方法包括差速离心(differential centrifugation)、密度梯度超速离心(density-gradient ultracentrifugation)、尺寸排阻(size exclusion)、磁激活(magnetics activated)、基于polymer(polymer-based)、免疫学方法(immunological methods)和微流体(microfluidics)。

 

痛点:

  • 其中一些纯化方法不是特异性的,因为它们共同纯化外泌体和其他细胞外囊泡。 这意味着当涉及到外泌体内容物的纯化时,细胞外囊泡的内容物也将被纯化。

例如,如果外泌体沉淀中含有凋亡小体,则凋亡小体中所含的DNA也会随着外泌体的RNA、microRNA和蛋白质内容物一起被纯化。这可能会误导潜在的分析。

  • 这些方法中的大多数都需要花费大量的时间。

例如,基于polymer的方法需要过夜孵育期。

  • 其中的一些方法的低通量限制了样本量,并最终限制了外泌体的多样性或产量。
  • 其中的一些方法需要在外泌体纯化之前进行预处理,以及特殊的仪器。

外泌体

 

Norgen用于外泌体纯化的SiC技术:该纯化技术通过调节样品的pH值来改变外泌体表面蛋白的电荷,使其与碳化硅技术结合。

 

艾美捷科技作为专业的生命科学领域解决方案供应商,为您推荐独家代理Norgen Biotek品牌的各种外泌体纯化试剂盒操作快速、灵敏、特异,允许高通量,不需要特殊的仪器或预处理。产品仅限用于科研学术研究用途,不得用于医疗与诊断。

产品名称及描述 货号 上样量范围
Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Mini Kit 58300 50 µL - 1 mL
Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Midi Kit 58500 1 mL - 4 mL
Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Maxi Kit 58600 4 mL - 10 mL
Urine Exosome Purification and RNA Isolation Mini Kit 58400 250 µL - 1 mL
Urine Exosome Purification and RNA Isolation Midi Kit 58700 2 mL - 10 mL
Urine Exosome Purification and RNA Isolation Maxi Kit 58800 11 mL - 30 mL
Cell Culture Media Exosome Purification and RNA Isolation Mini Kit 60700 5 mL - 10 mL
Cell Culture Media Exosome Purification and RNA Isolation Midi Kit 60800 10 mL - 20 mL
Cell Culture Media Exosome Purification and RNA Isolation Maxi Kit 60900 20 mL - 35 mL
Saliva Exosome Purification Kit 65300 Up to 2 mL

 

Norgen试剂盒的方法原理:

(1)将引入 ExoC buffer 来调整样品的pH值,从而改变外泌体表面蛋白质的电荷。

(2)一旦 SiC slurry E 被加入到样品中,改性的表面蛋白将结合到 SiC 上并形成沉淀颗粒。

(3)由于蛋白质结合的 RNA 也会与 SiC 结合,下一步将从SiC和蛋白质结合的RNA中分离外泌体。 ExoR buffer将被引入沉淀颗粒中,并再次修饰外泌体表面蛋白。

(4)外泌体将从 SiC 中释放出来,上清液中将包含纯化的外泌体。

 

Norgen的SiC技术用于从外泌体中纯化RNA:

(1)一旦外泌体被纯化,外泌体的内容物就可以被用来研究了。

(2)Norgen的RNA纯化试剂盒也使用SiC技术:

      不使用苯酚或氯仿(他们有高度毒性和影响下游分析);

灵敏度高,意味着不需要载体RNA(这又会影响下游处理,如测序);

没有大小偏差或GC含量偏差(独特的)。

(3)注意:由于RNA的浓度较低,因此使用bioanalyzer(低至50 pg)或Norgen自己的定量试剂盒(低至1 pg)进行RNA定量是很重要的,因为它们的检测限很低。

由于缺乏核糖体RNA,因此RIN值和260:280比值不适用。

 

额外补充的要点:

(1)在纯化外泌体和RNA方面没有达到预期的产量。产量差异是很大;它取决于细胞的活性、健康状况、年龄等。RNA产量一般在1-100 pg/μL范围内。

(2)Norgen试剂盒可以从新鲜或冷冻样品中纯化外泌体。但是,如果您要使用冷冻样品,不要去除样品中形成的蛋白质沉淀物这点很重要,因为它会含有外泌体

(3)优秀文章鉴赏:Human myeloma cell- and plasma-derived extracellular vesicles contribute to functional regulation of stromal cells. Proteomics. 2021 (当您对使用Norgen试剂盒纯化的外泌体用于蛋白质组学有疑问时,请参考这篇文章。本文展示了正确的分析方法,并证明从Norgen试剂盒中纯化的外泌体可用于蛋白质印迹、质谱、纳米颗粒和电子显微镜检查。)

该文章DOI: 10.1002/pmic.202000119

 

Tips:低丰度RNA的定量

(1)无法使用NanoDrop进行定量。需要其它方法。

(2)请参阅Application Note 47 - Revised Guidelines for RNA Quality Assessment for Diverse Biological Sample Input.

 

 

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来源:【产品组合】Norgen外泌体纯化相关产品要点解析

 

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