新型双泛素底物—精准检测去泛素化酶活性

 

【前情回顾】LifeSensors超全泛素及多聚泛素链

 

泛素-蛋白酶体(ubiquitin-proteasome system,UPS)途径介导的蛋白降解是机体调节细胞内蛋白水平与功能的一个重要机制。负责执行这个调控过程的组成成分包括泛素及其启动酶系统和蛋白酶体系统。泛素启动酶系统负责活化泛素,并将其结合到待降解的蛋白上,形成靶蛋白多聚泛素链,即泛素化。蛋白酶体系统可以识别已泛素化的蛋白并将其降解。此外,细胞内还有另一类形成反向调节的解离泛素链分子的蛋白酶——去泛素化酶(Deubiquitinase,DUB)。

 

在UPS系统中,DUBs主要通过水解泛素羧基末端的酯键、肽键或异肽键,将泛素分子特异性的从链接有泛素的蛋白质或者前体蛋白上水解下来。DUBs对蛋白质的结构和泛素化的方式(如K48、K63、K11等)都具有选择性,因此不同的DUBs在调节泛素化修饰中起到了各种各样的作用。不断有研究发现许多DUBs的功能紊乱与多种疾病相关,包括癌症、神经退行性疾病、血液疾病、以及一些传染病。并且,DUBs目前也已经成为重要的药物作用靶点。DUBs活性检测的难点是合成一种适用于高通量筛选(high-throughput screening,HTS)的生理学相关底物以反映DUBs的异肽酶活性。

 

当前,用于测量泛素/泛素样蛋白(Ub/Ubl)异肽酶活性的可商购试剂和检测方法是主要基于对线性肽-或酰胺键的裂解,但是这种裂解方式无法反映真实的异肽键的几何类型。另外,用于实时监测多聚泛素链降解的其他基于荧光的均相测定法需要多个酶促步骤,或者需要在泛素分子的N末端进行特异性修饰,这些处理都会破坏蛋白构象的完整性。目前的这些检测试剂和测定方法无疑还无法满足研究学者对DUBs活性检测在均一稳定性,生物学相关和高通量筛选分析上的需求。

 

DUBs活性检测

 

作为泛素研究领域的专家,LifeSensors可为您提供一种新型的双泛素底物,通过反应后的荧光读数反应DUBs活性。LifeSensors提供的双泛素分子(Diubiquitin,DiUb)是K48或K63(最广泛形式的多泛素连接)通过异肽键连接的形式。这些底物可用于确定DUBs对底物的特异性,监测DUBs介导的异肽裂解的动力学参数,以及研究多泛素化蛋白的选择性去偶联。

 

双泛素底物

 

这些双泛素底物是一类新的连续性试验底物,用于研究异肽键的裂解。野生型泛素C末端一般是通过异肽键与第二个泛素分子的Lys48或Lys63连接,其中一个泛素分子上标记了荧光猝灭剂,另一个泛素分子上标记了荧光报告基团,这样就形成了一个内部猝灭的能量转移荧光分子对(IQF-diubiquitins)。双泛素分子未裂解时,报告基团的荧光信号被猝灭基团吸收,检测不到荧光信号,加入DUBs后,双泛素分子底物被裂解,导致猝灭荧光基团与报告荧光基团分离,荧光信号增强。每个双泛素底物都可以在不同位点(K63-1-2-3-4-5-6或K48-1-2-3-4-5-6)进行标记,以便对特定的DUBs形成优化的双泛素底物。重要的是,荧光和淬灭基团的引入并不影响泛素分子的天然结构。通过这种生理底物检测泛素异肽酶活性的方法是对真核蛋白质组学这一重要研究领域的重大突破。

 

类型 货号 名称 描述
标准品 DU0121 Ub-TAMRA Reference Standard 四甲基罗丹明(TAMRA)标记泛素,标准品
双泛素-K48 DU4801 Di-Ubiquitin K48 (IQF, Position-1) 在不同位点(1、2、3、4、5、6)标记荧光基团的双泛素-K48
DU4802 Di-Ubiquitin K48 (IQF, Position-2)
DU4803 Di-Ubiquitin K48 (IQF, Position-3)
DU4804 Di-Ubiquitin K48 (IQF, Position-4)
DU4805 Di-Ubiquitin K48 (IQF, Position-5)
DU4806 Di-Ubiquitin K48 (IQF, Position-6)
双泛素-K36 DU6301 Di-Ubiquitin K63 (IQF, Position-1) 在不同位点(1、2、3、4、5、6)标记荧光基团的双泛素-K36
DU6302 Di-Ubiquitin K63 (IQF, Position-2)
DU6303 Di-Ubiquitin K63 (IQF, Position-3)
DU6304 Di-Ubiquitin K63 (IQF, Position-4)
DU6305 Di-Ubiquitin K63 (IQF, Position-5)
DU6306 Di-Ubiquitin K63 (IQF, Position-6)
在线客服 在线客服雷雷 在线客服闪闪

 

看到这儿,您心动了吗?马上联系小艾吧!

或者扫描下方二维码,即可联系您的专属客服哦~

 

 

艾美捷科技有限公司,通过提供完整的产品和服务体系、便利的客户关系和供应链管理,为生命科学研究工作者提供整体打包方案。我们的企业的核心价值观:“激情、敬业、学习、创新、合作、卓越”。激发我们内在的创造力,提供有竞争力的生物医学产品和服务,持续为客户创造最大价值是我们的企业使命。我们的企业愿景是成为受人尊重的生物医学产品及服务供应商。

 

作为一家具有尖端的技术实力、一流的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业,总部位于武汉光谷国家级高新技术开发区,服务面向全国。艾美捷科技是集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品、整合的解决方案,及优质的物流服务。为了更好的服务客户,公司组建了一支经验丰富的研发团队-艾美捷生物技术中心,进入研发生产阶段,将更优质的产品推荐给国内生物领域的同仁们!

 

艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。

 

三点:

企业使命:激发我们内在的创造力,提供有竞争力的生物医学产品和服务,持续为客户创造最大价值。

企业愿景:成为受人尊重、世界一流的生物医学产品及服务供应商。

艾美捷定位:通过提供完整的产品和服务体系、便利的客户关系和供应链,为生命科学研究工作者提供整体打包方案。

 

六观:

价值观:激情、敬业、学习、创新、合作、卓越。

 

每日生物评论

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen: