体外诊断之化学发光免疫分析方法

 

体外诊断试剂是指在疾病的预测、预防、诊断、治疗监测、预后观察和健康状态评价的过程中，用于人体样本体外检测的试剂、试剂盒、校准品、质控品等产品。随着医学的发展，体外诊断试剂的品种、功能及适用范围也在不断扩展，受到的社会关注度日益提升。体外诊断试剂在现代医疗体系中发挥着无可替代的作用，堪称“医生的眼睛”，其安全性直接关系到人民群众的切身利益。

 

化学发光免疫分析作为体外诊断检测技术的一种重要技术手段，兴起于上世纪70年代中期，发展至今已经成为一种成熟先进的超微量活性物质检测技术，应用范围十分广泛。该技术近10年发展迅猛，是目前推广应用最快的免疫分析方法，也是目前最先进的标记免疫测定技术，灵敏度和精确度比酶免法、荧光法高几个数量级。目前已成为融合众多学科知识的一种检测技术, 在临床检验、药物分析、环境监测等领域得到广泛的应用。

 

今天小艾就带你扒一扒这个神奇的“化学发光免疫分析技术”：

 

化学发光免疫分析技术概述

 

化学发光免疫分析(Chemiluminescence immunoassay,CLIA)，是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放射免疫分析、酶免疫分析、荧光免疫分析和胶体时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项新的免疫分析技术。

 

化学发光免疫分析技术原理

 

在化学发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应技术和化学发光技术。其基本原理是免疫反应中的酶作用于发光底物，使之发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体回到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信号测量仪器即可测量出光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比，由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。

 

按照反应模式的不同，化学发光免疫分析技术分为双抗体夹心法、竞争法及间接法等反应模式，如图：

 

图1. 双抗体夹心法

 

图2. 竞争法

图3. 间接法

 

按照发光底物的不同，化学发光免疫分析技术分为直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析、电化学发光免疫分析。

 

（一）直接化学发光剂

用吖啶酯直接标记抗体（抗原），与待测标本中相应的抗原（抗体）发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光 。由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准曲线上计算出待测抗原的含量。

 

（二）化学发光酶免疫分析

化学发光酶免疫分析（Chemiluminescence  enzyme immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（ALP）来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原（抗体）发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物（发光剂），酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。

 

（三）电化学发光免疫分析

电化学发光免疫分析是电化学发光技术和免疫分析技术的结合。首先是在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，用电化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+标记Ab，通过Ag-Ab反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的Ag或Ab进行定量/定性。

 

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