Cytoskeleton 肌动蛋白(生物素,兔骨骼肌)纯度和生物活性

兔骨骼肌肌动蛋白(货号#AKL99)已被修饰为在随机表面赖氨酸残基处含有共价连接的生物素。生物素的活化酯用于标记蛋白质。标记化学计量已被确定为每个肌动蛋白单体约1个生物素。生物素化的肌动蛋白的分子量约为43kDa。AB07以冻干粉末形式提供。冻干蛋白在10°C下干燥储存至<4%湿度时可稳定保存6个月。 蛋白质应用蒸馏水复溶至10mg / ml。然后将蛋白质置于以下缓冲液中:5 mM Tris-HCl pH 8.0,0.2 mM CaCl2、0.2 mM ATP、5% 蔗糖和 1% 葡聚糖。

 

作为Cytoskeleton全国总代理,艾美捷科技强烈推荐Cytoskeleton热销产品肌动蛋白(生物素,兔骨骼肌)产品仅用于科研,不可用于临床诊断。

 

Cytoskeleton公司目前主要的产品有340余种,其产品主要覆盖肌动蛋白,微管蛋白,马达蛋白,小G蛋白,细胞外基质,活细胞成像等相关领域,提供对应的蛋白质,抗体,检测与分析试剂盒,并且产品线还在不断的扩大中。

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肌动蛋白(生物素,兔骨骼肌) AB07-A 查看

 

肌动蛋白(生物素,兔骨骼肌)用途:

  • 显微注射到肌肉细胞中,然后对链霉亲和素偶联金颗粒进行电子显微镜检查,以确定修饰肌动蛋白的细胞定位。
  • 体外运动性实验使用与荧光珠结合的F-肌动蛋白的生物素化种子进行激光镊子操作。
  • 使用生物素化的F-肌动蛋白或G-肌动蛋白生产亲和柱,以提取和纯化新型蛋白质。
  • 纯化蛋白质或使用生物素 F-肌动蛋白或 G-肌动蛋白与链霉亲和素磁珠进行生物测定。

 

肌动蛋白(生物素,兔骨骼肌)纯度和生物活性:

AB07纯度测定
图1:AB07纯度测定。在10%SDS-PAGE系统中通过电泳分离43μg生物素化肌动蛋白样品(分子量约12kDa)。蛋白质用考马斯蓝染色。使用精密红色蛋白质测定试剂(Cat.# ADV02)测定蛋白质定量。
检测 1 ng 的生物素化肌动蛋白

取决于其在体外有效聚合成细丝并在旋转下测定中与未聚合组分分离的能力。严格的质量控制确保80-90%的生物素化肌动蛋白可以在此测定中聚合。这与未修饰的肌动蛋白(分类#AKL99)的聚合能力相当。

为了确定生物素标记的效率,通过电泳分离纳克量的生物素化肌动蛋白并电印迹到硝酸纤维素膜上。然后用链霉亲和素连接的碱性磷酸酶探测印迹。质量控制确保肌动蛋白上的生物素标记物可以检测到低至1ng水平的蛋白质(见图2)。最终产品中没有明显的自由标签。

图2.检测 1 ng 的生物素化肌动蛋白。在12%聚丙烯酰胺凝胶上通过电泳分离生物素化肌动蛋白的连续稀释液,并印迹到硝酸纤维素上。然后用链霉亲和素碱性磷酸酶(Sigma)探测膜,并用1步NBT / BCIP试剂(Pierce)检测。泳道 1:1000 ng,泳道 2:100 ng,泳道 3:10 ng,泳道 4:1 ng 生物素化肌动蛋白。

 

Cytoskeleton专注于生物化学和细胞过程研究中的纯化蛋白和便捷试剂盒开发与生产。公司提供药物筛选、信号转导、蛋白质转录后修饰(PTM)、细胞骨架研究相关的系列试剂盒和产品,尤其以细胞骨架相关研究见长,既能满足于样品较少的科学研究,也可以用于小规模筛选研究和高通量大规模筛选研究。此外,公司还提供微管蛋白,肌动蛋白,小G蛋白,GAPs,GEFs等现有产品的药物筛选服务。

 

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