Jackson HRP标记亲和纯化山羊抗小鼠IgG(H+L)二抗方案

二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体,上面通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛,如ELISA、化学发光,免疫组织化学,免疫细胞化学,流式细胞术等。二抗是体外诊断试剂开发和生产过程中的总要原料之一,合理、灵活地选择和使用二抗有助于节约产品研发周期、提高产品灵敏度。

 

上一期中小编带大家了解了辣根过氧化物酶HRP标记亲和纯化山羊抗兔IgG(H+L)二抗(111-035-003),今天小艾(艾美捷科技)带大家一起来看一下Jackson ImmunoResearch品牌另一个IVD原料中的二抗“宠儿”:辣根过氧化物酶HRP标记亲和纯化山羊抗小鼠IgG(H+L)二抗115-035-003)。

 

辣根过氧化物酶HRP标记亲和纯化山羊抗小鼠IgG(H+L)二抗

 

115-035-003产品信息一览表:

115-035-003 产品信息一览表
英文名称 Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)
中文名称 辣根过氧化物酶HRP标记亲和纯化山羊抗小鼠IgG(H+L)二抗
靶标 小鼠
宿主 山羊
抗体形式 全IgG
特异性 IgG(H + L)
偶联标记物 辣根过氧化物酶(HRP)
产品类别 完整IgG亲和纯化的抗体
克隆性 多克隆
产品状态 冻干粉(具体以所购批次的说明书为准)
保存和溶解 原装冻干粉储存在2-8°C。用产品说明书指定体积的dH2O复水,如果不清晰,则离心。在使用当天准备工作稀释液。未稀释液体产品在2-8°C下可稳定保存6周。(具体以所购批次的说明书为准)
溶解后保存方法 方法一:分装并冷冻于-70°C或更低的温度,避免反复冻融。
方法二:添加等体积的甘油(ACS级或更高),使最终浓度减半,并以液体形式存储于-20°C。
有效期为自溶解日起一年。如果测试结果对预期用途是可接受的,有效期可以延长。
纯化方法 使用与琼脂糖珠偶联的抗原通过免疫亲和色谱法从抗血清中纯化抗体。
缓冲液成分 0.01M磷酸钠,0.25M NaCl,pH 7.6(具体以所购批次的说明书为准)
稳定剂 15 mg/ml牛血清白蛋白(不含IgG,不含蛋白酶)(具体以所购批次的说明书为准)
防腐剂 无(注意:使用叠氮化钠作为防腐剂将抑制辣根过氧化物酶的酶活性)
建议的工作浓度或稀释范围 1:500 - 1:5000用于免疫组化/免疫细胞化学
1:5000 - 1:100000用于显色法的ELISA和WB(显色底物)
1:10000 - 1:200000用于使用ECL底物的WB

 

辣根过氧化物酶(HRP)偶联物来源于辣根植物(Armoracia Rustana)的根,是通过改良的Nakane和Kawaoi方法(J. Histochem. Cytochem. 1974. 22, 1084)制备。过氧化物酶偶联物通常用于免疫组织化学,蛋白质印迹和ELISA。亲和纯化的抗HRP酶及其偶联物可用于检测辣根过氧化物酶抗原或用于含HRP试剂的信号放大。对于哺乳动物细胞的免疫染色,使用抗HRP酶的优点是减少了背景,因为该抗体不能识别在那些细胞中发现的内源性过氧化物酶样酶。

 

辣根过氧化物酶(HRP)偶联物

 

当与适当的底物结合使用时,结合了报告酶的二抗可用于显色和化学发光检测方法。 酶结合物可以应用于许多免疫技术,以提供强大而灵敏的检测。辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶可与二抗,链霉亲和素和纯化的蛋白偶联。

 

小艾贴心Tips:

  1. 注意内源性过氧化物酶。一些组织包含可与过氧化物酶底物反应的内源性过氧化物酶样酶,导致背景染色。可用过氧化氢预处理样品来耗尽内源酶的活性,从而可以清楚地检测到特定信号。
  2. 不要在含有HRP的溶液中加入叠氮化钠。它将使酶失活。
  3. 如果添加甘油以延长溶解后产品的保质期,请确认甘油为ACS级或更高级。因为较低等级的甘油可能会严重抑制过氧化物酶的活性。

 

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来源:IVD原料之二抗篇:HRP标记亲和纯化山羊抗小鼠IgG(H+L)二抗

 

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